6-磷酸葡萄糖脫氫酶（Glucose - 6- phosphate dehydrogenase，G6PDH試劑盒說明書（50T）
產品6-磷酸葡萄糖脫氫酶含量測定原理簡介：

6-磷酸葡萄糖脫氫酶是磷酸戊糖途徑的關鍵酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化為6 -磷酸葡萄糖酸內酯，同時
將NADP 還原為NADPH，以供生物合成及維持細胞內的還原狀態，因此6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低
可以從一定程度上反映出生物體的生物合成和抗氧化能力。
G6PDH 能使NADP 還原成NADPH，6-磷酸葡萄糖 + NADP →6-磷酸葡萄糖酸內脂+NADPH；在一定
反應時間內其活性高低與反應前后生成物濃度的變化呈線性關系。本測試盒通過在340 nm 下測定NADPH
增加速率來反應G6PDH 活性的大小，NADPH 濃度升高越多則G6PDH 活力越大。
試驗中所需的儀器和試劑：
紫外可見分光光度計、37℃恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 石英比色皿、蒸餾水
北京索萊寶科技有限公司供應生化法測定6-磷酸葡萄糖脫氫酶含量測試盒產品組成：

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：儲備液50 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2 支，-20℃保存；用時每只加275μL 雙蒸水充分溶解備用；
試劑三：粉劑×2 支，-20℃保存；用時每只加275μL 雙蒸水充分溶解備用。
操作生化法檢測6-磷酸葡萄糖脫氫酶含量步驟：

一、待檢測樣品測定的準備：
(1) 細菌、細胞或組織樣品的制備 ：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，棄上清，按照每 200 萬細菌或細胞加入 400μL 提取
液的比例充分勻漿以破碎并裂解細胞。8000g 離心10 分鐘，取上清，置冰上待測。
組織：稱取100mg組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待
測。
（2）血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定操作表：
測定管 對照管
試劑一（μL） 750 750
試劑二（μL） 10 10
試劑三（μL） 10 10
樣本（μL） 30
蒸餾水（μL） 30
將上述試劑按順序加入1 mL 石英比色皿中，加樣本的同時開始計時，在340 nm 波長下記錄20 秒時的
初始吸光度A1，比色后迅速將比色皿連同反應液一起放入37℃或25℃水浴中（哺乳動物用37℃，非哺乳
動物用25℃），準確反應5 分鐘。迅速取出比色皿并擦干，340 nm 下比色，記錄5 分20 秒時的吸光度A2，
計算ΔA=A2-A1。
實驗中生化法檢測6-磷酸葡萄糖脫氫酶含量注意事項：
1、若A2-A1 大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1 小于0.5，可提高檢測靈敏度。
2、實驗時，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一37℃或25℃水浴放置。
3、比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將
此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
4、最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。
G6PDH活力單位的計算：
1、血清（漿）G6PDH活力的計算:
單位定義：每升血清（漿）在反應體系中每分鐘生成1 μmol/L 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/L）= 857×(ΔA 測定管－ΔA 對照管)
2、組織中G6PDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位定義：每mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘生成1 nmol/L 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/mg prot）= 857×(ΔA 測定管－ΔA 對照管)÷蛋白質濃度（mg/mL）
（2）按樣本鮮重計算：
單位定義：每mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘生成1 nmol/L 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/g mass）＝857×(ΔA 測定管－ΔA 對照管)÷樣品鮮重（g/mL）
3、細菌或細胞中G6PDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位定義：每mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘生成1 nmol/L 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/mg prot）＝857×(ΔA 測定管－ΔA 對照管)÷蛋白質濃度（mg/mL）
（2）按細菌或細胞密度計算：
單位定義：每1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘生成1 nmol/L 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/104 cell）＝857×(ΔA 測定管－ΔA 對照管)÷細菌或細胞密度（104 個/mL）


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