高效液相色譜

HPLC，是在經典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。它與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜。又因分析速度快而稱為高速液相色譜。

使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，最后通過分析比對這些信號來判斷待側物所含有的物質。高效液相色譜作為一種重要的分析方法，廣泛的應用于化學和生化分析中。高效液相色譜從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別，它的特點是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相，適于分析高沸點不易揮發、分子量大、不同極性的有機化合物。

高效液相色譜的特點：

高壓——壓力可達150～300 kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 kg/cm2以上。

　　高速——流速為0.1～10.0 mL/min。

　　高效——塔板數可達5000/米。在一根柱中同時分離成份可達100種。

　　高靈敏度——紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。

HPLC與經典液相色譜相比有以下優點：

　　速度快——通常分析一個樣品在15～30 min，有些樣品甚至在5 min內即可完成。

　　分辨率高——可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果。

　　靈敏度高——紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學檢測器可達0.1pg。

　　色譜柱可反復使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。

　　樣品量少，容易回收——樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。

　　變性高效液相色譜技術(DHPLC)在醫學基因檢測中的應用．

DHPLC基因診斷癌癥相關基因：

篩查癌癥易感基因；

DHPLC法測定甲基化；

反映整個片段的CpG甲基化狀態；

適用于所有CpG 甲基化測定；

準確性，穩定性好；

能夠定量；

同時能夠獲得靶序列點突變/SNP的信息；

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