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雷公藤甲素與順鉑聯合使用對裸鼠載人SC-M1胃癌腫瘤模型藥效評價

摘要：通過檢測雷公藤甲素與順鉑聯合使用時對裸鼠載人SC-M1胃癌腫瘤模型的療效。結果顯示雷公藤甲素（Triptolide， TPL）與順鉑（CDDP）聯合使用能有效地抑制裸鼠SC-M1胃癌腫瘤的生長，且抑制效果明顯優于雷公藤甲素或順鉑單獨使用。
關鍵詞：雷公藤甲素， 順鉑， 裸鼠載人SC-M1胃癌腫瘤模型，抗腫瘤， SC-M1

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一、?實驗原理
雷公藤是一個有著悠久、廣泛應用歷史的中藥。雷公藤甲素是雷公藤的主要活性成分之一，是一個具有多種生物活性的天然產物，來源于中藥雷公藤的根，研究表明它具有抗氧化，抗類風濕，抗老年性癡呆癥、抗癌等功效?，F代研究表明雷公藤甲素不僅有抗類風濕作用，還有抗癌作用，在美國正在進行一期抗癌臨床研究。最近的研究發現，雷公藤甲素除了特異地影響某些蛋白和信號通路以外，還會抑制廣泛的基因轉錄，但其作用機理有待進一步明確。
裸鼠為嚴重免疫缺陷的小鼠，對人源性癌細胞或組織免疫排異極小，目前將人類腫瘤細胞系移植到免疫缺陷的裸鼠體內所建立的人類異種移植物腫瘤模型，已經廣泛用于臨床前抗癌藥藥效的檢測。

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二、?實驗目的
觀察雷公藤甲素與順鉑聯合使用時對裸鼠載人SC-M1胃癌腫瘤模型的療效。

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三、?實驗材料
1.?實驗材料及實驗動物
雷公藤甲素 （T3652，Sigma）；順鉑（P4394，Sigma）；SC-M1胃癌細胞（CRL-5822，ATCC）；動物品系：SCID裸鼠 (SPF級)；體重：18-20g/6周齡；性別：雄性； 動物數：每組6只，共5組，共30只。
2.?數據分析
GraphPad Prism（Ver. 5，GraphPad Software） 作圖，并進行雙側t檢驗。

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四、?實驗步驟
實驗共分為以下幾個步驟：
1.?SC-M1細胞培養：
取液氮凍存的SM-C1細胞株，復蘇后，置37℃、5% CO2條件下培養。
2.?腋下成瘤：
SM-C1經傳代培養后，取對數生長期的細胞，用PBS制備成5×107細胞/ml濃度的細胞懸液，接種于裸鼠腋部皮下（每只小鼠100μl，共計5×106細胞）。待能觀察到腫瘤后，隨機分為4組。
3.?給藥：
實驗分組及給藥：
1）陰性對照組 PBS（靜脈注射， 一周三次，連續三周）。
2）雷公藤甲素治療組0.4mg/kg（靜脈注射，一周三次，連續三周）。
3）順鉑治療組3mg/kg（靜脈注射，一周三次，連續三周）。
4）雷公藤甲素+順鉑聯合治療組 （TPL，0.4mg/kg；CDDP，3mg/kg）（靜脈注射，一周三次，連續三周）。??
5）按實驗設計方案給藥。所應用的飼料、墊料、籠具及接觸的器械等均應高壓消毒后使用，裸鼠置于層流架中飼養。
4.?實驗結果記錄和分析：
動態觀察和測試腫瘤大小以及荷瘤鼠體重，每2天用卡尺測量各裸鼠腫瘤的短徑（a）及長徑（b），按(a2×b)/2公式計算腫瘤體積。根據測量計算的腫瘤體積計算出相對腫瘤體積（RTV），RTV＝Vt/V0。其中V0為隨機分組（即d0）時的腫瘤體積，Vt為每一次測量（即dn）時的腫瘤體積。三周后處死各組動物，剖取腫瘤稱重，按下列公式計算相對腫瘤增殖率：相對腫瘤增殖率%=（給藥組RTV/對照組RTV）×100%。

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五、?實驗結果

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??????????????????????????????????????????????????????????????????????圖1. 各治療組腫瘤大小比較

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??????????????????????????????????????????????????????????????????圖2. 各治療組腫瘤大小統計分析
????????????????????????????????????????????????????????????????? ***表示p<0.001，**表示p<0.05

?從圖1和圖2的結果可以看到，雷公藤甲素與順鉑聯合用藥可以有效的抑制SC-M1胃癌細胞腫瘤在SCID小鼠模型中的生長，且效果優于兩種藥物單獨使用。

六、?參考文獻
1.?Li CJ, Chu CY, Huang LH, et al. Synergistic anticancer activity of triptolide combined with cisplatin enhances apoptosis in gastric cancer in vitro and in vivo. Cancer Lett. 2012; 2: 203-213

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