Optimized Trypsin
with EDTA,without Ca2+ Mg2+
cat:cc17.3 mfd:201902
size:100ml storage:-20
推薦：保種體系試劑
特點：
保種試劑系列，適合較難養類細胞，消化時間稍長，為工業細胞工廠用戶開發，后續細胞狀態會更好。同株細胞消化時間固定，室溫即開即用。無消化過度因素影響。
圖片中為293T,無吹打、機械動作分散細胞，圖片中是消化3分鐘左右，全部是化學作用將成團細胞分散成單個細胞，彩圖為293T共聚焦96小時（增強貼壁試劑輔助，國產玻片），稍后用戶可查詢文獻。看我用戶圖片（一直保密，用戶肯定比我共聚焦還要漂亮）共聚焦國產玻片處理后才可以，進口大牌子玻片不用處理(做細胞爬片很多實驗室失誤在這），關于共聚焦其他細節老師可來信溝通。
推薦細胞：乳腺癌類，卵巢癌類，原代、干細胞、293T、易成片團聚細胞（成片團聚也跟很多因素有關，具體問題具體分析）歡迎各位老師來信溝通，我司對細節及步驟問題常年統計。
原裝進口500ML大包裝胰酶注意事項，很多老師評價大包裝不好用，稀釋液一定要用對，購前要跟廠家問清楚拿那種稀釋，不一樣的稀釋液會使胰酶PH有變化，影響細胞實驗。
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對消化要求較高案例細胞介紹（胰導β細胞、胰腺類細胞消化推薦、B lymphocyte cell 、胰腺原代）建議與討論，國內實驗室養的都不是很順利。
如后面是長期課題，就上述提幾個建議，要是國內庫購買，建議按以下給出試劑都可嘗試，目的是看看能否將生長慢問題解決。建議先看看能否找到問題關鍵點。先上手后，總結下這只細胞特點（培養過程中問題我們可討論），若能解決問題，在后面考慮從ATCC購買或者原代提取，目前覺得消化步驟較重要，我列下試劑，后面您參考用。

消化部分推薦-若有老師有相關經驗與技巧，能否列出產品，并告知理由。
Trypsin--建議不用或者低濃度加其他消化試劑結合試試。胰酶對細胞損傷估計很大，這點我們覺得較關鍵，建議結合列出兩個消化混合使用較穩妥，推薦濃度0.05（我們這款表現更優）
理由： the most common being incomplete solubility, lot-to-lot variability, cell toxicity, and cell surface protein/receptor damage.最常見的是不完全溶解、多點變異、細胞毒性和細胞表面蛋白/受體損傷。
Elastase 彈性蛋白酶在胰腺中產生，相對柔和一些。文獻常用方案是原代細胞消化：胰酶+膠原酶+彈性蛋白酶
DNaseⅠ由外分泌腺分泌，在胰腺和腮腺中最為豐富。常用是易成團細胞，建議這個試劑先消化。
后面這兩個推薦理由是，胰腺類細胞也很難養，β細胞來源胰腺，所以列出。



--B lymphocyte cell 案例細胞成份比較
案例細胞Rat Pancreas 大鼠胰腺 （INS-1細胞)來源成份參考（Hygromycin B --Blasticidin S HCl--Zeocin Selection Reagent ）

ATCC-NAMALWA (ATCC CRL-1432）這個是人來源的β細胞，完全培養基作參考，RPMI 1640 medium with 2 mM L-glutamine adjusted to contain 1.5 g/L sodium bicarbonate, 4.5 g/L glucose, 10 mM HEPES, and 1.0 mM sodium pyruvate, 92.5%; fetal bovine serum, 7.5%

推薦無血清方案 CC-3211（ B lymphocyte Medium），Recombinant Human Granulocytemacrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) to the 100 ml aliquot of LGM-3™ Medium for a final GM-CSF concentration of 800 U/ml. Transfer 80,000 units of Recombinant Human Interleukin 4 (IL-4) to the 100 ml aliquot of LGM3™ Medium for a final IL-4 concentration of 800 U/ml. Stir until all cytokines are dissolved.

轉染前調整細胞狀態推薦，消化與促貼壁結合使用，一樣培養條件，曾強貼壁試劑增強時間為二十分鐘，有相關需求老師可列出目的需求。

普通試劑研發歷程：
胰酶統計了六年，推出我們的Optimized Trypsin（下面有產品鏈接），對胰酶挑剔的細胞有易成團的神經膠質類、肝類、乳腺癌類、胰島胰腺類、免疫懸浮（這個成團也可通過離心后，加入低濃度胰酶解決團聚）團聚問題不解決，凍存后的細胞團DMSO深入不充分，容易有冰晶形成損傷細胞，導致復蘇后狀態不理想，成團成片細胞培養過程中中間細胞得不到完全培養基營養吸收。通過反復多家實驗室驗證，這點可用我們推薦胰酶，常溫消化，完全利用化學作用，無機械力消化成單個細胞，俺我們方法與0.25濃度胰酶消化后，吹打散細胞方法凍存后復蘇比較細胞成活率，這個成活率高低，也是轉染率高低理由。此產品推出后，經用戶使用后統計總結目前結論：胰島胰腺類細胞沒有慣例問題，新手培養2020到2021培養胰島胰腺類細胞系，沒碰到BUG，今年準備完成國內庫保鐘難細胞系：beas-2b HK-2 INS-1 THLE-3，胰酶算是一個基礎條件，有準備養這類細胞老師，可來信標明，相關資料可討論


20211101原料影響因素漲價，老用戶價格不變。巨噬類成片特性解決想當出色。
各部位組織器官巨噬開始統計-培養基選擇討論，建系可行性討論：1；類上皮與組織上皮如何區分-腸道分布。2：骨髓中DC與巨噬如何區分。3：神經膠質與巨噬如何區分。神經類研究老師能否給些膠質與巨噬區別，我們有些膠質細胞系培養統計數據，培養中成片特新有相關一致特點。4：心內：塵細胞，心力衰竭細胞與巨噬的共性。5：疑問：骨髓來源巨噬：如何避免成纖維類淹沒巨噬6：增殖與不增殖：大部分觀點是不增殖，這類大部分是文獻派。細工不同觀點：目前培養技術方法試劑等有很大改善-與較早文獻比較。對小鼠單核巨噬細胞白血病細胞；RAW 264.7焦熟悉也統計了多年，國內庫用這個細胞驗證血清內毒素很準（我們統計大概有十年之久，碰到有特點的血清，這個細胞驗證很準，包括現在國外大牌子的血清，普通用戶不是很關注，這類細胞一上便知結果。以下列出細胞例如武漢庫，昆明庫，已有不少建立成功的巨噬類細胞系。各種問題來信都可討論。

20220121：產品統計結果，最核心是細胞膜無損傷，傳代后直接生長，沒有膜損傷后恢復期，所以細胞狀態會更優，是我們產品特點。
常規量：疫苗生產用細胞工廠、類器官、溶瘤。
超大量：多層板生物反應器、碟片式生物反應器、固定床生物反應器培養消化中，細胞消化時間較長，傳統方式不適合，細胞消化前后細胞質量不一致，前面損傷大，后面還沒裂解細胞，導致細胞整體質量均一行差，死細胞碎片較多，影響后期目的實驗，我們在國內正規庫建系原代測試，消化幾個小時也沒問題，消化形成單個傳代后，正常增值生長。超大量培養關于濃縮培養基相關，可關注我們后期推出的維持培養基開發，血清替代（核心全部用國內生產技術，評測標準按進口品牌平行測試為設計標準。結合維持培養基優勢，重組蛋白生產相關純化后期收獲蛋白前可換成血清替代品，從細胞質量狀態，后期純化蛋白量，優勢很大。北京院校有超大量細胞培養要求用戶（實驗室空間實現生產中試細胞量相當容易，例如一個固定床生物反應器一個占地幾平米的面積，相當幾百個10層細胞工廠，我們可配合完成交鑰匙前全部評測）


20220207
適用實驗
細胞表面標志物分析、病毒生長檢測、血清饑餓誘導的休眠檢測、通過致癌基因轉染的轉化分析、神經嵴細胞遷移分析、細胞增殖、細胞趨觸性分析、腫瘤細胞遷移分析、常規細胞傳代、生產規模擴大（生物反應器）和流式細胞分析使用、自動化培養中消化需容錯率較高需求用戶（消化與損傷容錯率高）

細工該產品在以下細胞應用中，有空泡越來越厲害問題，可用該產品培養一段時間看下效果：成纖維細胞、角質化細胞、血管內皮細胞、肝細胞、血管平滑肌細胞、肝細胞祖細胞、原代雞胚神經細胞、骨髓干細胞、胰島胰腺類原代，細胞系、貼壁 CHO 和 BHK 細胞、巨噬細胞、293 細胞、L929 細胞、永生化小鼠睪丸生殖細胞、3T3、Vero、COS、HeLa、NT2、MG63、M24 和 A375 轉移性黑色素瘤、神經膠質瘤 U251 和 D54、HT1080 纖維肉瘤細胞和 Sf9 昆蟲細胞、人胰腺癌細胞；PANC-1：人胚胎胰腺組織來源細胞；CCC-HPE-2：人胰腺腺泡上皮癌；HPAC：人胰腺癌細胞；AsPC-1：人胰腺導管癌細胞；CFPAC-1：人原位胰腺腺癌細胞；BxPC-3：人胰腺癌細胞；HS 766T：人胰腺癌細胞系；SW 1990：人胰腺導管癌細胞（淋巴結轉移）；T3M-4：小鼠胰腺癌細胞（B類）；Pan02：tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細胞（B類）；Pan02-CAG-tTA-2D1：tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細胞（B類）；Pan02-CAG-tTA-3E6：tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細胞（B類）；Pan02-CAG-tTA-4B3：tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細胞（B類）；Pan02-CAG-tTA-4C5：大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞；AR42J：人胰腺癌細胞HPAF-II：人胰腺癌細胞PANC-1：人胰腺癌細胞MIA PaCa-2：人原位胰腺腺癌細胞BxPC-3：人胰腺癌細胞CFPAC-1：人胰腺癌細胞系SW 1990：人轉移胰腺腺癌細胞AsPC-1：人胰腺癌細胞PANC-1：人胰腺癌細胞系；SW 1990：人胰腺導管腺癌細胞；CFPAC-1：人胰腺癌細胞；MIA PaCa-2：人胰腺癌細胞；PANC-1：人胰腺細胞系；HPC-Y5：人源胰腺癌細胞；PAXC-003：人源胰腺癌細胞；PAXC-002：人源胰腺癌細胞；PAXC-010：大鼠胰腺導管干細胞；XMRPDSC2012：中國人胰腺癌原位癌細胞系；HPPS-1：人胰腺癌神經浸潤細胞系；HPNI-1：中國人胰腺癌原位癌細胞系；STL-C1：人胰腺癌神經浸潤細胞系；STL-C2：人胰腺癌細胞系；BxPC-3 M8：人胰腺癌細胞；CFPAC-1：人胰腺癌細胞；PANC-1：：大鼠胰島細胞瘤細胞；INS-1：大鼠胰島β細胞瘤細胞；RIN-m5F：小鼠胰島內皮細胞MS1：小鼠胰島素瘤胰島β細胞Beta-TC-6：小鼠胰島素瘤胰島β細胞Beta-TC-6：大鼠胰島干細胞；ALLRPISC2012：大鼠胰島β細胞瘤細胞；RIN-m5F：人胰島融合細胞； 1.1B4

該產品已列入保種試劑級別，建議操作步驟按我司說明書，實驗后不理想用戶，如需參考建議，麻煩列出培養試劑耗材廠家貨號，問題詳細描述，預期目標。
產品評測統計過程中遇到細胞培養高手較多，與常規胰酶使用方法不同處是我們該品不怕消化過，建議高手先靜心，從容操作。


20221108 流式原代篩選參考-保種胰酶消化應用
保種理念：平時要拿難養的細胞，先應用，拿到預期所需目的指標，或者實驗結果不理想，提高細胞質量的需求。
推廣應用很慢，但是使用過的用戶，了解其中緣由的行家都很認可。
給新用戶一些用戶使用后的技巧分享，細胞培養量超多的量很大的，我們產品優勢就來了，保守的說，一次處理十盤以上應該沒問題，熟練用戶應該幾十盤同時處理也不成問題。

流式原代篩選參考-保種胰酶消化應用
流式設備
MoFlo XDP超速流式細胞分選系統
MoFlo Astrios EQ超高速流式分選系統
該設備實驗室（協和、北醫、清華、北大、腦科學、廈大、南大、浙大）
相關培訓資料，巨噬細胞研究分析，原代的應用

討論-胰酶消化，修復相關因子，方法統計中
細胞篩選中，組織前處理可討論，問題描述要清晰（描述關鍵詞：離體時間，消化成份，理由）
流式篩選后，培養救助，細胞膜恢復與救助理由參考（經驗來自統計：轉染后損傷、耐藥后損傷、電轉后損傷、難養救助經驗）結合各類細胞本身特性特點。
描述關鍵詞：離體時間，消化成份，理由？
救助：成分，是否有相關案例應用與經驗儲備。理由？
問題描述，預期要求。

20230615:
難點：易團聚、成片、凍存復蘇活率不高、轉染效果差、提升細胞質量、細胞救助、后續實驗類器官、依托細胞大量培養后蛋白生產。建系目的等

相關產品及開發思路
培養中解離、胰酶優化解離、無酶解離、EDTA解離、難培養肝、胰島胰腺對胰酶敏感細胞、上皮、等大面積培養（單層培養，多層培養），大液體培養，細胞工廠，減少消化損傷，提高后面相關試驗可行性，特高蛋白產量，超量維持培養。

20240104 胰島胰腺、肝、肺、脾、腸，原代灌注提取提取法的的，中性酶+DNAase方案替代，我們這款應該更優，特別是胰島胰泡分離，與胰島成團分離（包括干細胞消化EDTA法替代），這幾種常用替代理由，讓細胞狀態更加，為后面建系保種等做些儲備備份方案參考。關鍵點，細胞膜無損。

20240323

成團成片階段總結

2018年開始重點關注成團成片，因來源難養系，上皮，SV40，膠質為主這類問題及工業生產用細胞工廠大面積培養中提升細胞培養質量等需求，深入開發了相關胰酶消化產品，開發要點是細胞膜無損，還要消化成單個細胞，（凍存復蘇步驟驗證產品的優勢及可行性）難轉染細胞通過解決成團成片提高轉染效率的案例統計，能夠大大提升實驗預期效果，

23年以來統計了不少類器官培養，成干培養中，免疫細胞、懸浮培養，胰島胰腺原代中成團成片中問題，說些參考建議，后期驗證有效果可來信告知，目的是有效無效不以個別案例說明有效，普遍案例大多數有效才證明可行，成團成片可看成組織內形態狀態（分化后維持培養后續在統計討論），有些共性。原代組織處理，也是消化成單個容易培養（離體后開關通路，較快適應培養體系并生長）成團成片培養相對難，也可理解成2D,3D培養。我們目的很明確的是，原代建系傳代培養，在工程用2D培養細胞量會很大（在更大面積培養中細胞質量一致性尤為關鍵）

組織-細胞
細胞-組織

20240415:建系應用優勢，胰島胰腺原代分離中，細胞與胰泡部分分離，與組織物分離中，組織體內生理特性（主要是離體入皿后，適應中，通路的開關在首代培養中極為重要）胰酶要點是既要充分分離細胞，還要避免細胞膜避免損傷，都要靠適合的胰酶濃度把握，細工做了大量相關細胞系等對胰酶敏感細胞系濃度篩選，開發出容錯冗余非常有優勢的Optimized Trypsin,工程應用建系應用用戶可申請試用比較，郵件聯系

20240915

自動化轉染應用中，細工冗余試劑開發產品優勢-胰酶
1：解決成團成片，團聚問題-轉染前優化細胞胰酶優勢凸顯，容錯率高并超長時間消化，沒有消化中變縮就終止消化，預實驗先行為準。
以成團成片，易團聚細胞為例 NIH 3T3 CHO-K1 HT29，腺癌，免疫類轉染前對照組消化后細胞狀態通過細工胰酶消化后無損試劑特點，避免常用濃度0.25習慣損傷（鏡下細胞變縮后馬上終止消化）建議細工胰酶預實超長時間消化驗證穩妥，冗余試劑理念在細胞工廠大面積工業應用中，細工就推出冗余理念，對胰酶敏感細胞做了長期統計（細工胰酶篇有詳細介紹統計歷程，說明書介紹比較詳細），自動化如有貼壁不牢、懸浮細胞類，建議目前流行用反轉法轉染，細工貼壁試劑能進一步提升細胞質量與增加轉染效率。成團成片團聚前面都有各類難養細胞系都有詳細介紹，具體細胞問題具體分析，可深入討論。細胞工廠大面積培養，從種子庫到規模培養技術儲備充足五年以上（工業應用成熟）
2：培養過程添加解離配套試劑

20241105
優化胰酶結合凍存復蘇應用參考

凍存前細胞處理（特別是成團成片，易團聚類），細工胰酶對細胞膜無損，化學力消化后成單個狀態，在執行凍存復蘇程序降溫，細胞活率大大提升，各類特點不一（免疫類團聚，神經膠質類團聚，腺類團聚）隨各有各的特性，也有些總體規律性，例如上清回輸，適合大部分團聚成團成片，要結合含血清無血清培養特點。

20241214
種子庫應用參考-胰酶（冗余試劑自動化更多痛點難點統計）：
對細胞種子要求高用戶，建議長時間做重組與豬牛來源高質量來源作比較，國內建系需更好培養條件，以下相關介紹實驗統計都建議后面討論與應用中問題討論。

關鍵詞：成團成片
最早統計的是十年前開始免疫類系，上皮，293，近幾年這類問題增加了更多，無血清及新廠家也建議參考進去，特別是新化學成分或不同標準原料，建議通過問題分析長期評測評價種子用試劑穩定性。

細工在解決成團成片，說兩個已應用的案例參考，應用結果在后面實驗都能明顯提升實驗結果，如果在您的實驗中有明顯效果，建議告知細工，為后面國內建系共同做些基礎數據統計。

黑點，生長慢，不成瘤，細胞層面優化，也是以胰酶消化對細胞膜損傷考慮推出的。

膜片鉗應用開始統計細胞處理胰酶相關統計，就神經元，心肌預實驗有上我們優化胰酶用戶，我們可提供免費試用與其他消化品作比較實驗，相關細胞膜片鉗實驗越來越多用戶組做，對膜損傷需求嚴格的用戶，可討論細節，建議詳細溝通問題痛點，已有多年相關應用案例，具體問題可具體分析。

組織-細胞，相關文件組織附件參考，研發型可來信標注。

相關關鍵詞：成團成片、膜損傷、工業應用細胞維持培養及細胞質量提升，建系用試劑推薦（對胰酶敏感類細胞痛點問題解決案例應用）、轉染、凍存復蘇應用胰酶相關上述應用比較、上述通過自己實驗痛點案例細胞驗證預實驗最準確。EDTA含量要求并優化。

我司關注細胞：工業種子庫、神經類原代，系（雪旺，膠質，神經元） 、腺類原代，系（并包含腺，神經，上皮特點的）類器官后期需神經與上皮，內皮等共同培養，膜片鉗需細胞膜損傷小等實驗。

研發需相關資料可來信告知

20250107

細工試劑-優化胰酶的關鍵實驗應用參考

轉染前消化、凍存前消化、成瘤前消化、耐藥株處理、種子庫細胞痛點可討論

使細胞單個避免機械力-鈍力損傷，生長特性團聚，成團成片，堆疊特性，統計歷程，
2012-2025年開始統計免疫細胞：細胞系，原代等、常用系THP-1、NK92、JURKAT、等
2015-2025年全套細胞培養水試劑種子庫級別推出后，各類難養細胞系統計，肝類，胰島胰腺類、乳腺類、卵巢類、神經類、上皮類歸納共性、PDX（輔助建系同做）、腸類原代建系（該案例用戶不在國內庫存細胞，不能公布）
2018-2025年開始統計：成團成片-各類細胞特點
2019-2025年統計各類團聚之間關系，腺類、神經類、（胰島胰腺原代-膽管互作用建系，肝建系-酮元素），類器官-建系思路開始。胰島胰腺原代（該案例用戶不在國內庫存細胞，不能公布）
2020-2025年：類器官-建系思路為主，2024年已有公司推出同類方案

團聚：區別原始生長特性，與試劑、技術、手法、生長中其他因素引起的，為準確區分問題，簡單方便找到痛點，建細胞系是最終找到培養過程中痛點問題全部通過各類問題驗證，已提出常見痛點問題細工適合國內體系的方案，黑點、生長慢、不成瘤，簡易單克隆方法，耐藥株建立痛點參考、成瘤不穩定-細胞培養層面解釋（不成瘤，空洞，消失）

種子庫級別應用參考、結合以下幾種實驗優勢結合整體-處理成團成片、堆疊，使細胞單個避免機械力-鈍力損傷的轉染前消化、凍存前消化、成瘤前消化、耐藥株處理、種子庫細胞等

上述優勢，建議預實驗先行驗證后，驗證可行后，后面幾點延展應用
成瘤：高質量細胞，建議共同完成少量細胞量接種動物穩平驗證，大大減少細胞培養相關試劑，耗材，人力成本。（告知成瘤需細胞接種量用戶，我們可配套換算出節省成本，人工等）
類器官建系思路、普通培養基+血清，簡單易行，成本可控，簡單易行可重復充足細胞量，在進行減血清方案，無血清方案，每個實驗室根據自己資金情況，每個實驗室都熟悉的操作步驟，都能簡單重復實驗，（自動化培養-微流芯片控制培養-冗余試劑開發）

思考：
看完協和庫類器官，芯片相關報道，類器官細胞建系還是通點，PDX歷程也是建系為痛點，順序性展望資歷淺不敢為妄談，通過細胞系成瘤不穩定接種細胞做些反向相關統計，北京地區實驗室，技術型公司可深入討論。
該套試劑應用，慢病毒、腺病毒、蛋白需滴度高的用戶，我司冗余試劑優勢可詳盡介紹，廠家建議可痛點驗證。

20260209

細胞凋亡組-優化胰酶，空泡問題統計與參考討論無競爭無重復，相關儀器開發等應用參考
細胞凋亡，優化胰酶消化對細胞膜損傷影響細工統計參考，國產試劑種子庫保存應用后期應用胰酶敏感細胞驗證-胰島胰腺組系保種，給相關研發組參考，細胞救助中黑點，生長慢中也是細工方案中關鍵試劑，為細胞凋亡精準控釋試劑開發與技術儲備，有需要免費試用比較可告知實驗室，優化胰酶應用介紹-無細胞膜損傷-胰酶敏感細胞篩選，種子庫細胞系保種，臨床樣本高活率-單細胞研究應用，細胞救助-黑點培養去除，生長慢細工方案-無血清各類應用-角質細胞案例。
細胞凋亡，空泡：區分操作步驟引起與化學誘導出現，細工統計細胞系保種問題這類問題，建議慢操作與避免熟練老手統計應用匯總。后期自動化開發相關提前技術儲備。
建系目的，診斷試劑開發-免疫熒光，原代測序-細胞高活率，細胞系DNA提取-國內正規庫來源細胞或ATCC直接來源細胞系培養問題統計與細工全套試劑與技術共享（這類不管是工業與科研，周期長，對細胞與技術要求高）