產品介紹

Mag-Fura-2, AM 是一種比率型、可紫外光激發的細胞內鎂指示劑。其光譜特性與 Fura-2 非常接近。這種乙酰氧甲酯 (AM) 形式可用于非侵入性細胞內加載。它也可用于測量活細胞中的高鈣離子濃度。

操作步驟

儲備液配制

所有未使用的儲備液（除非另有說明）應在配制后分裝成單次使用量，并于-20°C保存。避免反復凍融。

Mag-Fura-2 AM儲備液

使用優質無水DMSO配制2至5 mM的Mag-Fura-2 AM儲備液。

實驗操作步驟

工作液配制

Mag-Fura-2 AM工作液

實驗當天，將Mag-Fura-2 AM溶解于DMSO或解凍儲備液至室溫。

選用合適緩沖液（如Hanks和Hepes緩沖液），加入0.04% Pluronic® F-127，配制2至20 µM的Mag-Fura-2 AM工作液。對多數細胞系，推薦終濃度為4-5 μM。具體染料負載濃度需通過實驗優化。

注意：1.非離子型表面活性劑Pluronic® F-127可增強Mag-Fura-2 AM水溶性，AAT Bioquest提供多種Pluronic® F-127溶液。
          2.若細胞存在有機陰離子轉運體，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板內終濃度0.5-1 mM）以減少去酯化染料的滲漏。AAT Bioquest提供多種ReadiUse™丙磺舒產品（包括水溶型、鈉鹽及穩定化溶液）。

標準實驗流程

以下為活細胞加載AM酯的推薦方案，請根據實際需求調整：

1.在生長培養基中培養細胞過夜。

2.次日向細胞板加入1X Mag-Fura-2 AM工作液。

注意：若待測化合物與血清存在干擾，加載染料前需更換為新鮮HHBS緩沖液。

3. 37°C細胞培養箱中孵育30-60分鐘。

注意：部分細胞系延長孵育時間（>1小時）可增強信號強度。

4.移除工作液，更換為HHBS或自選緩沖液（如適用，可含1 mM丙磺舒等陰離子轉運體抑制劑）。

5.加入刺激劑后，立即使用配備Fura 2濾光片組的熒光顯微鏡或者集成程序化液體處理系統（如FlexStation）的熒光酶標儀在Ex/Em₁ = 340/510 nm截止475 nm和Ex/Em₂ = 380/510 nm截止475 nm進行熒光測量檢測熒光