NovaBlue(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品名稱： NovaBlue(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱： NovaBlue(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品編號(hào)： MCC0097
產(chǎn)品價(jià)格： null
產(chǎn)品產(chǎn)地： 中國(guó)
品牌商標(biāo)： Frdbio
更新時(shí)間： 2023-09-13T15:59:41
使用范圍： 僅供科研使用
- 聯(lián)系人 : 趙經(jīng)理
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- 所在區(qū)域 : 湖北省
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NovaBlue(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞
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產(chǎn)品編號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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MCC0097 |
NovaBlue(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 |
100μl*10 |
保存條件：-80℃。
1.產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本產(chǎn)品是采用大腸桿菌NovaBlue(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞。NovaBlue(DE3)來(lái)源于K12菌株，具有極高的轉(zhuǎn)化效率，是轉(zhuǎn)化效率最高的原核表達(dá)菌株，可同時(shí)用于普通質(zhì)粒的構(gòu)建和蛋白的原核表達(dá)。
基因型：F`[ proA+B+ lacIq ZΔM15::Tn10 (TetR)] endA1 hsdR17(rk12-,mk12+) supE44 thi -1 recA1
gyrA96 relA1 lac(DE3)
特點(diǎn)：NovaBlue(DE3)菌株染色體DNA 中整合了λ 噬菌體DE3 區(qū)，使得NovaBlue(DE3)菌株可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，廣泛用于pET系列，pGEX，pMAL 等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。NovaBlue(DE3)菌株具有四環(huán)素抗性，endA1 和recA1 的突變有利于插入DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA 的提取；lacZΔM15 的存在使NovaBlue(DE3)可用于藍(lán)、白斑篩選轉(zhuǎn)化效率達(dá)109cfu/μgDNA。
2.使用說(shuō)明：
1．取100 μl感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中融化。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，靜置冰浴30min。
3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中靜置2-3min，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
4．每個(gè)離心管中加入450 μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養(yǎng)45～60min使菌體復(fù)蘇。
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12~16h。
3.注意事項(xiàng)：
1．感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化，8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2．混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3．轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
*本試劑僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用