NovaBlue(DE3) 感受態細胞

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1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌NovaBlue(DE3) 感受態細胞菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。NovaBlue(DE3)來源于K12菌株，具有極高的轉化效率，是轉化效率最高的原核表達菌株，可同時用于普通質粒的構建和蛋白的原核表達。

基因型：F`[ proA+B+ lacIq ZΔM15::Tn10 (TetR)] endA1 hsdR17(rk12-,mk12+) supE44 thi -1 recA1 gyrA96 relA1 lac(DE3)

特點：NovaBlue(DE3)菌株染色體DNA 中整合了λ 噬菌體DE3 區，使得NovaBlue(DE3)菌株可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，廣泛用于pET系列，pGEX，pMAL 等質粒的蛋白表達。NovaBlue(DE3)菌株具有四環素抗性，endA1 和recA1 的突變有利于插入DNA 的穩定和高純度質粒DNA 的提?。?/span>lacZΔM15 的存在使NovaBlue(DE3)可用于藍、白斑篩選轉化效率達10⁹cfu/μgDNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，靜置冰浴30min。
3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。
4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。
5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．感受態細胞最好在冰中緩慢融化，8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2．混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。

3．轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

*本試劑僅供實驗室研究使用