植物直擴PCR試劑盒（含染料）
產品名稱： 植物直擴PCR試劑盒（含染料）
英文名稱： Plant Tissue Direct PCR Kit (With Dye)
產品編號： N132023
產品價格： null
產品產地： 美國
品牌商標： Arcegen
更新時間： 2025-08-28T11:57:06
使用范圍： null
| 規格 | 價格 |
| 50 T | 700.0 |
| 200 T | 1900.0 |
- 聯系人 : 孟醒
- 地址 : 申江南路4388號1幢2層208室
- 郵編 : 201314
- 所在區域 : 上海
- 電話 : 189****7703 點擊查看
- 傳真 : 點擊查看
- 郵箱 : cmeng@magibagbio.com
產品簡介
本品是一款可直接對不同類型植物葉片進行PCR擴增的試劑盒，適應性廣、穩定性強。試劑盒采用獨特的裂解緩沖液體系，可以快速的裂解多種植物樣品并釋放出基因組DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代謝產物等，即可將釋放出的基因組DNA作為模板直接用于PCR反應。此外，樣品使用量少，低至1 mm植物葉片即可進行實驗。
本試劑盒中提供的2× Plant PCR Master Mix具有很強的擴增兼容性，能直接以待測樣品裂解液為模板，進行高效特異性擴增。該試劑為2倍濃縮PCR反應混合液，包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程，降低污染幾率且含有示蹤染料，PCR產物可直接電泳。
該試劑盒可用于轉基因植株鑒定、植物基因分型等。
產品規格
|
產品貨號 |
N132023E |
N132023S |
|
產品規格 |
50 T |
200 T |
組分信息
|
組分編號 |
組分名稱 |
N132023E (50 T) |
N132023S (200 T) |
儲存條件 |
|
N132023-A |
Buffer P1 |
1.25 mL×2 |
5 mL×2 |
2-8℃ |
|
N132023-B |
Buffer P2 |
500 μL |
1 mL×2 |
2-8℃ |
|
N132023-C |
2 × Plant PCR Master Mix* |
500 μL |
1 mL×2 |
-25~-15℃ |
【注】：*2× Plant PCR Master Mix：包含熱啟動Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優化劑以及穩定劑等，同時包含電泳Loading Buffer，PCR完成之后可直接電泳。
產品儲存
1. 試劑N132023-A【Buffer P1】，置于2-8℃保存。有效期1年。
2. 試劑N132023-B【Buffer P2】，中和裂解產物，利于更長時間保存樣本，置于2-8℃保存。有效期1年。
3. 試劑N132023-C【2×Plant PCR Master Mix】，-25~-15℃保存，避免反復凍融。有效期1年。
4. 試劑盒有效期1年。
操作注意
1) 做葉片實驗時，建議使用新鮮采取的葉片組織，若為長期冷凍組織，需-80℃保存，應盡量避免反復凍融，以免造成模板降解，影響PCR效率。葉片組織以幼嫩為宜，若為成熟的葉片，避免使用葉片主脈部位組織。
2) 建議擴增片段長度1 kb以內，以便擴增效率最佳。
3) 取樣時使用打孔器或者刀取適宜大小的樣本，樣本不同時，打孔器或者刀每次處理樣本前需清洗干凈。
4) 對于葉片組織，建議取1-10 mm的葉片，過小會使PCR擴增產量低，過多會抑制PCR反應，采用加熱裂解法、槍頭搗碎、研磨儀破碎的方式處理植物葉片，處理后需震蕩離心，務必取上清液試驗，沉淀會嚴重抑制PCR反應。
5) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
6) 本產品僅作科研用途！
操作說明
1. 植物葉片
1) 研磨裂解法：
a. 研磨儀破碎：將直徑5 mm左右的葉片置于50 μL Buffer P1中，用研磨儀加鋼珠（鋼珠直徑3 mm左右，共2個）破碎葉片（45 Hz，1 min），葉片破碎后溶液呈現綠色，瞬時離心，上清液請放在4℃備用，取1 μL用于PCR擴增。
b. 槍頭搗碎：推薦使用幼嫩葉片。將直徑5 mm左右的葉片置于50 μL Buffer P1中，用槍頭將葉片搗碎，搗碎后溶液呈現綠色，瞬時離心，上清液請放在4℃備用，取1 μL用于PCR擴增。
2) 加熱裂解法：推薦使用幼嫩葉片。將直徑5 mm左右的葉片置于50 μL Buffer P1中，95℃加熱5-10 min（確保裂解液完全浸沒葉片），較難裂解的葉片（老葉片）可適當延長時間（10-20 min），加熱裂解后溶液呈現綠色，震蕩混勻，瞬時離心，上清液請放在4℃備用，取1 μL用于PCR擴增。
3) 直接法：推薦使用幼嫩葉片。使用打孔器或者刀，將直徑1 mm左右的葉片直接加入到PCR反應體系中；復雜樣本或者是長片段的擴增，推薦使用直徑<1 mm的葉片。
2. PCR反應體系
表1. PCR反應體系
|
組分 |
體積（μL） |
體積（μL） |
終濃度 |
|
2× Plant PCR Master Mix |
10 |
25 |
1× |
|
Forward Primer (10 μM) |
0.5 |
1 |
0.2-0.25 μM |
|
Reverse Primer (10 μM) |
0.5 |
1 |
0.2-0.25 μM |
|
裂解產物（DNA模板） |
1 |
2 |
- |
|
ddH2O |
To 20 |
To 50 |
- |
【注】：各組分使用前應充分混勻。
1) 模板加入量：小于PCR反應體系的5%，過多會嚴重抑制PCR反應，強烈推薦加入1 μL模板。葉片直擴優先推薦研磨儀裂解法。
2) 引物終濃度：0.2-0.25 μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可在0.1-0.5 μM范圍內調整引物濃度。
3) 反應體系：推薦使用20 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
4) 體系配制：配制好PCR反應體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應液集于管底。
5) 對照反應：建議進行PCR時，設置陽性和陰性PCR對照反應以便于排除假陽性或假陰性的干擾。
為了更穩定的保存裂解后的模板，將轉移出來的上清液，按照裂解產物（DNA模板）：Buffer P2 = 5:1的比例混合，混勻后-20℃保存，穩定保存隨時間和樣本狀態不同而有所不同。如果處理后的植物葉片上清液一周內用于PCR擴增，不用加Buffer P2，上清液請保存在-20℃。
3. PCR反應條件
表2 PCR反應程序
|
循環步驟 |
溫度（°C） |
時間 |
循環數 |
|
預變性 |
94 |
5 min |
1 |
|
變性 |
94 |
10 sec |
35 |
|
退火* |
50-65 |
20 sec |
|
|
延伸** |
72 |
1 min/kb |
|
|
終延伸 |
72 |
5 min |
1 |
【注】：
1) *退火溫度：請參考引物的理論 Tm 值，退火溫度可設置低于引物理論值 2-5℃。
2) **延伸時間：需要根據片段的長度來確定，對于1 kb以內的DNA片段，建議延長時間為1 min。
常見問題與解決方案
|
常見問題 |
可能原因 |
解決方法 |
|
陽性對照、待測樣本均無條帶。 |
PCR反應體系或反應條件不合適。 |
使用梯度PCR摸索PCR最佳反應條件。 |
|
PCR試劑保存不當失去活性。 |
2×PCR Mix應保存于-25~-15℃，使用時避免反復凍融。若使用頻繁，可在2-8℃短時間存放。 |
|
|
引物設計問題。 |
嘗試重新設計引物進行檢查。 |
|
|
陽性對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱。 |
不當儲存或長期儲存引起試劑活性喪失。 |
使用新鮮的試劑。 |
|
裂解液、中和液加入比例不當，裂解混合液影響PCR體系的pH值。 |
正常條件下，中和后的裂解混合液的pH應該在7-8左右（裂解產物和Buffer P2嚴格按照5:1的量進行中和）。 |
|
|
樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久，DNA基因組已經降解。 |
裂解混合液可在2-8℃保存5天，盡量使用新制備的裂解液混合液進行PCR。 |
|
|
模板加入量不適合。 |
在反應體系＜5%范圍內優化模板加入量。 |
|
|
PCR循環數不足。 |
適當增加PCR的循環數，推薦在35-40循環為佳。因為模板復雜，一般PCR反應要比用純化的DNA模板多5-10個循環為佳。 |
|
|
非特異性擴增 |
PCR退火溫度太低，循環數、引物濃度或模板濃度太高。 |
提高PCR退火溫度，降低PCR循環數、引物濃度或模板濃度。 |
|
PCR引物錯配。 |
重新設計PCR引物。 |
|
|
配制PCR反應體系時溫度太高或配制完成后放置時間太久。 |
PCR反應體系的配制在低溫下進行，配制完成后盡快進行PCR擴增反應。 |
|
|
陰性對照出現目的條帶 |
操作工具或試劑污染。 |
實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。 |
|
樣本間交叉污染。 |
每個取樣器只對一個樣本使用；或取完一個樣本后，將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。 |