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通過使用工具病毒載體介導將外源基因導入靶細胞中,對疾病特定基因進行定向和組織特異性的改造,將為肝臟領域的疾病研究與治療提供強大工具,如肝硬化、肝纖維化等。
首先,肝臟研究如何選擇合適的病毒載體
慢病毒、腺病毒和腺相關病毒(AAV)等都是常用的工具病毒載體,在肝臟研究中如何選擇合適的病毒工具呢?
1.?慢病毒:慢病毒具有毒性低、損傷小的特點,且病毒感染細胞后,可以整合入基因組長期表達,是細胞實驗的首選。應用于在體注射時,引起的免疫反應較為溫和。
2.? 腺病毒:腺病毒載體容量大,不整合到染色體中,無插入致突變性。但表達時間短,在大部分細胞中,腺病毒可維持7-14 天的表達時間。且免疫原性高,應用于在體注射時易造成炎癥反應。
3.? 腺相關病毒AAV:AAV 體積小,滴度高,擴散性好,是在體實驗的首選。AAV有多種血清型,不同的血清型對不同的臟器有較高的識別及感染能力,其中AAV2型、8型、9型等對肝臟有較好的趨向性。
了解了這些病毒載體在肝臟研究中的優勢和不足后,如何根據實驗目的來挑選合適的基因操作工具呢?建議您可以從以下這幾個方面出發:
1. 工具載體的表達時間與實驗觀察時間是否相符;
2. 工具載體可以容納的片段大小與目的基因大小是否契合;
3. 工具載體對目的細胞、在體組織的轉導是否足夠高效。

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?常用基因操作工具選擇指南
吉凱小建議:
1.? 在基因大小允許的前提下,在體實驗建議優先選擇腺相關病毒(AAV)。AAV具有滴度高,擴散效果好,免疫原性低等特點,且AAV有多種血清型,2型、8型、9型等對肝臟有較好的趨向性。點擊了解更多AAV血清型選擇小竅門>>

2.? 細胞體外感染建議選擇慢病毒:慢病毒在感染細胞后2-4?天開始表達,且對細胞毒性低、損傷小。
3.? 如需目的基因在肝臟中特異性表達,可使用組織特異性啟動子,如肝臟特異性啟動子TBG。吉凱提供組織特異性啟動子載體的病毒包裝服務,點擊了解>>
注射方法
病毒工具在肝臟中的的注射方法
肝臟常用的注射方法有尾靜脈和肝門靜脈注射,兩種注射方法用量類似。下面以肝原位注射為例詳細說明。
1.?腹部切開后,尋找到肝門靜脈:將肝葉提起,下面就是門靜脈,因為下腔靜脈在后方,離腎臟比較近,所以,一般看到的大的靜脈就是門靜脈。
2.?注射病毒,穿刺后壓迫止血。

用量參考
肝臟注射病毒用量參考
以下表格中注射參數來自吉凱客戶發表文獻。更多肝臟病毒注射參數,點擊查看與下載>>
1. 慢病毒

代表文獻(31)吉凱客戶文章Jourmal of viology,2016,90(4):1729-1740

2. 腺病毒

代表文獻(36)吉凱客戶文章Laboratory Investigation,2017,97(9):1020
3. 腺相關病毒


代表文獻(37)吉凱客戶文章Cellular physiology and biochemistry,2016,40(5):1117

