PDX模型質控檢測試劑盒使用說明書(定量PCR法)

【產品規格】

PDX50  50T

【產品說明】

人源腫瘤異種移植模型（Patient-Derived tumor Xenograft , PDX）是將病人的腫瘤組織直接移植到免疫缺陷鼠而建立的人源異種移植模型，是癌癥機制研究和藥物測試的有用工具，但隨著傳代次數增加，腫瘤組織保真度下降。

本產品試劑盒采用雙色熒光探針 qPCR（FAM+HEX）檢測PDX模型總DNA中小鼠DNA的比例，并以此推導小鼠細胞浸潤比例，檢測對象為組織DNA。該試劑盒具有以下特點：

穩定：全程閉管操作，無交叉污染。                      

1. 可靠：樣本與多個內標同板檢測，減少孔間干擾。

2. 方便：操作簡單，無需電泳步驟。

3. 定量： △CT 值，可定量檢測。

【運輸及保存條件】

低溫冷凍運輸， -20℃保存，有效期 1 年，凍融以后，4℃保存，有效期4周。

【產品組分】

注：（1）Biowing®PDX qPCR SuperMix含引物與其他PCR成分；（2）Standard包含小鼠DNA和人基因組DNA，Standard1、2和3分別對應小鼠DNA含量為25%、50%和75%；(3)本試劑盒提供試劑，使用前請上下輕柔顛倒十次混勻，避免起泡，低速離心、小心開啟后使用。

【閾值設置】以50%標準品Standard2擴增曲線，設置閾值線，滿足下列CT值范圍

（1）人DNA擴增曲線CT值定為25±1；

（2）小鼠DNA擴增曲線CT值定為24±1。

【操作步驟】

1. 樣品準備

使用商業化DNA抽提試劑盒提取組織DNA，DNA純度A260/A280≈1.8，建議濃度為20-50ng/µL，上樣2µL。

注：樣品濃度過高或過低都會影響擴增效率，對實驗造成干擾，測量結果誤差較大。

2. qPCR反應體系及條件

反應體系以20µL為例

PCR儀設置以SLAN-96S為例。

【標準曲線】舉例

注：建議每批次檢測，均繪制標準曲線，三個陽性標準品，分別3次技術重復，繪制散點圖并添加線性擬合趨勢線，獲得回歸方程，用于小鼠細胞浸潤比例的計算。

【結果判讀】 以標準曲線的線性回歸方程為：Y=-0.4061*X+0.4089為例

PDX模型中細胞比例計算方法（鼠:人）：根據標準曲線計算PDX樣本中的鼠、人細胞比例。

注：標準曲線的線性回歸方程為：Y=-0.4061*X+0.4089

相關系數R²：0.9998

X：△Ct值（CT_小鼠-CT_人）

Y：PDX模型中人鼠混樣比例（樣本比例為小鼠細胞：人細胞）的log10值，即Y=log₁₀(小鼠:人比例)。

小鼠:人比例=power(10,Y)，

小鼠DNA占總 DNA 百分比=power(10,Y)/(1+ power(10,Y))

人DNA占總DNA百分比=1-小鼠DNA占總DNA百分比