Western Blottting工作流程，GE領先解決方案
產品名稱： Western Blottting工作流程，GE領先解決方案
英文名稱： Western Blottting workflow, GE's leading solution
產品編號： 001
產品價格： 100
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品牌商標： null
更新時間： null
使用范圍： null
Cytiva(思拓凡)
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| 問題 | 可能原因 | 解決方法 | 推薦 |
| 無信號 | 一抗和二抗不匹配 | 二抗需和一抗宿主的物種相同（如一抗來自兔，二抗為抗兔抗體）。 | 抗體查詢點擊此處 |
| 沒有足夠的一抗或二抗結合目標蛋白 | 使用高濃度抗體，延長4℃孵育時間（如過夜）。 | 抗體查詢點擊此處 | |
| 封閉劑與一抗或二抗有交叉反應 | 使用溫和的去污劑如吐溫-20，或更換封閉劑（常用的脫脂奶粉、BSA、血清或明膠）。 | 封閉劑查詢點擊此處 | |
| 一抗不識別檢測物種的蛋白 | 參照說明書，比對免疫原序列和蛋白序列以確保抗體和目的蛋白會發生反應，設置陽性對照。 | 抗體查詢點擊此處 | |
| 轉膜不充分 | 使用可逆染色劑例如麗春紅S檢測轉膜效果，檢查轉膜操作是否正確。PVDF膜需預先浸在甲醇中，然后浸到轉移緩沖液中。 | 轉膜查詢點擊此處 | |
| 洗膜過度 | 勿過度洗膜。 | 轉膜查詢點擊此處 | |
| 過度封閉使目標蛋白不能顯色 | 代替5%脫脂奶粉，使用含0.5%脫脂奶粉或無脫脂奶粉的抗體稀釋液，或更換封閉劑，減少封閉時間。 | 封閉劑查詢點擊此處 | |
| 一抗失效 | 使用新鮮一抗，重復使用有效濃度會降低。 | 抗體查詢點擊此處 | |
| 二抗受疊氮鈉抑制 | 避免疊氮鈉和HRP標記抗體一起使用。 | 抗體查詢點擊此處 | |
| 檢測試劑盒過期和底物失活 | 使用新鮮的底物。 | 檢測試劑查詢點擊此處 | |
| 背景高 | 未進行非特異性封閉或封閉不充分 | 延長封閉時間，考慮更換合適的封閉劑。推薦使用5%脫脂奶粉、3%BSA或血清封閉30分鐘。這些可以包含在抗體緩沖液中。 | 封閉劑查詢點擊此處 |
| 一抗濃度過高 | 稀釋抗體至合適濃度，以更高稀釋度抗體孵育更長時間。 | 抗體查詢點擊此處 | |
| 抗體孵育溫度過高 | 4℃孵育。 | 抗體查詢點擊此處 | |
| 二抗與封閉劑非特異性結合或反應 | 設置二抗對照（不加一抗）。 | 抗體查詢點擊此處 | |
| 一抗或二抗與封閉劑有交叉反應 | 在孵育和洗滌液中加入溫和去污劑如吐溫-20。脫脂奶粉含有酪蛋白，該蛋白本身就是一種磷酸化蛋白，會結合磷酸化特異性抗體而易產生高背景。使用BSA代替奶粉作為封閉劑。 | 抗體查詢點擊此處 | |
| 未結合蛋白質洗滌不充分 | 增加洗滌次數。 | 轉膜查詢點擊此處 | |
| 膜的選擇導致的高背景 | NC膜比PVDF膜背景低。 | NC膜查詢點擊此處 | |
| 膜干燥 | 在孵育過程中防止膜變干，在任何步驟都保證膜有充分的反應液，放入攪拌子不斷攪動或輕輕震蕩使膜浸在溶液中。 | 轉膜查詢點擊此處 | |
| “微笑”條帶 | 遷移過快；電泳溫度過高（改變了PH值和遷移速度） | 降低遷移速度或低溫電泳（冰庫或冰上） | 電泳試劑查詢點擊此處 |
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