Western Blottting工作流程，GE領(lǐng)先解決方案
產(chǎn)品名稱： Western Blottting工作流程，GE領(lǐng)先解決方案
英文名稱： Western Blottting workflow, GE's leading solution
產(chǎn)品編號(hào)： 001
產(chǎn)品價(jià)格： 100
產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標(biāo)： null
更新時(shí)間： null
使用范圍： null
Cytiva(思拓凡)
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| 問(wèn)題 | 可能原因 | 解決方法 | 推薦 |
| 無(wú)信號(hào) | 一抗和二抗不匹配 | 二抗需和一抗宿主的物種相同（如一抗來(lái)自兔，二抗為抗兔抗體）。 | 抗體查詢點(diǎn)擊此處 |
| 沒(méi)有足夠的一抗或二抗結(jié)合目標(biāo)蛋白 | 使用高濃度抗體，延長(zhǎng)4℃孵育時(shí)間（如過(guò)夜）。 | 抗體查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 封閉劑與一抗或二抗有交叉反應(yīng) | 使用溫和的去污劑如吐溫-20，或更換封閉劑（常用的脫脂奶粉、BSA、血清或明膠）。 | 封閉劑查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 一抗不識(shí)別檢測(cè)物種的蛋白 | 參照說(shuō)明書，比對(duì)免疫原序列和蛋白序列以確保抗體和目的蛋白會(huì)發(fā)生反應(yīng)，設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照。 | 抗體查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 轉(zhuǎn)膜不充分 | 使用可逆染色劑例如麗春紅S檢測(cè)轉(zhuǎn)膜效果，檢查轉(zhuǎn)膜操作是否正確。PVDF膜需預(yù)先浸在甲醇中，然后浸到轉(zhuǎn)移緩沖液中。 | 轉(zhuǎn)膜查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 洗膜過(guò)度 | 勿過(guò)度洗膜。 | 轉(zhuǎn)膜查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 過(guò)度封閉使目標(biāo)蛋白不能顯色 | 代替5%脫脂奶粉，使用含0.5%脫脂奶粉或無(wú)脫脂奶粉的抗體稀釋液，或更換封閉劑，減少封閉時(shí)間。 | 封閉劑查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 一抗失效 | 使用新鮮一抗，重復(fù)使用有效濃度會(huì)降低。 | 抗體查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 二抗受疊氮鈉抑制 | 避免疊氮鈉和HRP標(biāo)記抗體一起使用。 | 抗體查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 檢測(cè)試劑盒過(guò)期和底物失活 | 使用新鮮的底物。 | 檢測(cè)試劑查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 背景高 | 未進(jìn)行非特異性封閉或封閉不充分 | 延長(zhǎng)封閉時(shí)間，考慮更換合適的封閉劑。推薦使用5%脫脂奶粉、3%BSA或血清封閉30分鐘。這些可以包含在抗體緩沖液中。 | 封閉劑查詢點(diǎn)擊此處 |
| 一抗?jié)舛冗^(guò)高 | 稀釋抗體至合適濃度，以更高稀釋度抗體孵育更長(zhǎng)時(shí)間。 | 抗體查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 抗體孵育溫度過(guò)高 | 4℃孵育。 | 抗體查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 二抗與封閉劑非特異性結(jié)合或反應(yīng) | 設(shè)置二抗對(duì)照（不加一抗）。 | 抗體查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 一抗或二抗與封閉劑有交叉反應(yīng) | 在孵育和洗滌液中加入溫和去污劑如吐溫-20。脫脂奶粉含有酪蛋白，該蛋白本身就是一種磷酸化蛋白，會(huì)結(jié)合磷酸化特異性抗體而易產(chǎn)生高背景。使用BSA代替奶粉作為封閉劑。 | 抗體查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 未結(jié)合蛋白質(zhì)洗滌不充分 | 增加洗滌次數(shù)。 | 轉(zhuǎn)膜查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 膜的選擇導(dǎo)致的高背景 | NC膜比PVDF膜背景低。 | NC膜查詢點(diǎn)擊此處 | |
| 膜干燥 | 在孵育過(guò)程中防止膜變干，在任何步驟都保證膜有充分的反應(yīng)液，放入攪拌子不斷攪動(dòng)或輕輕震蕩使膜浸在溶液中。 | 轉(zhuǎn)膜查詢點(diǎn)擊此處 | |
| “微笑”條帶 | 遷移過(guò)快；電泳溫度過(guò)高（改變了PH值和遷移速度） | 降低遷移速度或低溫電泳（冰庫(kù)或冰上） | 電泳試劑查詢點(diǎn)擊此處 |
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