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或者經DEAE-纖維素柱層析后所制成的IgG亦可標記。如將IgG再通過葡聚糖凝膠G-200膠濾（用PH7.2 PBS洗脫）所得純化IgG用HRP標記則更佳。但損失較大，也有人用親和層析法提純抗體來標記的。但在用酶來標記抗體前，需測定一下抗體球蛋白效價和蛋白含量。一般用Beutner氏瓊脂糖散法測效價（即玻片雙相瓊脂擴散法），中央孔加1mg/ml抗原，周圍孔加不同稀釋度粗制或提純抗體（馬或羊抗人IgG），室溫擴散24小時，沉淀反應效價達到1：16以上者即可應用。而蛋白質含量可用751紫外線分光光度計測定，也可用Folin酚法測定。

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結合：用什么樣的方法將HRP與抗體球蛋白結合起來呢？當然不能用強烈的方法，因為強烈的方法會使酶和抗體失去活性。故只能用溫和的方法把酶和抗體結合起來。因此，必須使用結合劑。理想的結合劑應具備下列條件：（1）不影響酶及抗體活性，（2）不產生干擾物質，（3）抗體和酶結合后應有較高的產量，（4）不出現非特異性反應,(5)結合程序簡便，（6）來源易、價廉。目前常用的有戊二醛和過碘酸鈉二種。由于對所使用結合劑的針對性，因此標記的方法也有戊二醛交聯法和過碘酸鈉氧化法兩類。

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