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更新時間: 2026-05-06T11:23:51

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熒光定量PCR 多肽合成
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DNA克隆 全基因人工合成服務
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基因表達水平的檢測 總RNA的提取
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SiRNA構建  PCR擴增 差減雜交PCR
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DNA 測序原理

DNA 測序技術主要依據 Sanger 的雙脫氧鏈終止法。以 DNA 單鏈為模板,在特定條件下,用特異的引物在測序級 DNA 聚合酶的作用下,根據堿基互補配對原則,不斷將 4 種脫氧核糖核苷酸 (dNTP) 加到引物的 3- 羥基末端并使引物鏈得到延伸。這種鏈的延伸是通過引物的 3- 羥基和脫氧核糖核苷酸底物的 5- 磷酸基團形成磷酸二酯鍵來完成的。如果這種反應體系中加入雙脫氧核糖核苷酸 (ddNTP) ,這種 23ddNTP 的 5- 磷酸基團是正常的 (4 種不同的熒光標記 ) ,而 3 位置缺少羥基,因此在 DNA 聚合酶作用下,仍然可以通過 5- 磷酸基團與引物鏈的 3- 羥基反應摻入到引物鏈中,但是由于 ddNTP 沒有 3- 羥基,不能繼續與下一個 5- 磷酸基團形成磷酸二酯鍵而導致引物鏈延伸的終止。這樣,在測序反應體系中, DNA 引物鏈不斷合成與偶然終止,產生一系列的長短不等的核苷酸鏈,然后將這些反應產物進行電泳,即可得測序圖譜。

樣品要求

樣品類型

相應要求

菌體

1. 說明載體抗性類型,我們提供 Amp, Kan, Tet 及 Chl 四種抗生素。
2. 提供 1ml 左右過夜培養的菌液,加 15 滅菌甘油,于 Eppendorf 管中封口保存,防止交叉污染或滲漏。
3. 大量樣品測序,建議在一次性塑料培養皿固體培養基上穿刺培養。
4. 建議盡量提供穿刺培養的菌種。

質粒

1. 質粒溶于適量體積雙蒸水中(不含 TE ),電泳檢測總量大于 2mg 。

2. 建議用相關試劑盒純化。
3. 如有可能,同時提供 1ml 含有相應質粒的菌液備用。
4. 大質粒必需注明載體長度。

未純化 PCR 產物

1. 片段大于 150bp 。
2. 提供 50ul ~ 100ul PCR 擴增產物 ( 總量 500ng-1ug) 。
3. 取 3ul 樣品,電泳檢測應為明亮的一條帶,無雜帶。

純化 PCR 產物

1.PCR 產物溶于雙蒸水中(不含 TE )。

2. 濃度大于 20ng/ul ,體積大于 20ul ,長片段需適當增加量。
3. 電泳檢測條帶專一。

自備的引物

1. 濃度不低于 5pmole/ul( 或 5umol/L) ,體積大于 20ul 。
2. 隨機引物和簡并引物不能用于測序。
3. 盡可能提供引物全序列、 PCR 退火溫度,以供參考。