端粒相對長度檢測試劑盒使用說明書(定量PCR法)

【產(chǎn)品規(guī)格】

1.?TL50?50?*?3?Reaction

2.?TL100?100?*?3?Reaction

【產(chǎn)品說明】

端粒（Telomeres）：是真核生物線性染色體末端的非編碼串聯(lián)重復(fù)性(TTAGGG)n陣列，端粒長度的變化，與衰老、癌癥、或神經(jīng)退行性等多種疾病相關(guān)。定量PCR法是檢測端粒長度的經(jīng)典技術(shù)，用時短，操作簡單，結(jié)果準確，適用于批量樣本檢測。

本產(chǎn)品試劑盒采用雙色熒光 qPCR（SYBRgreen+VIC）檢測端粒相對長度，檢測對象為血液、口腔拭子或細胞DNA。該試劑盒具有以下特點。

1.?穩(wěn)定：全程閉管操作，無交叉污染。

2.?可靠：端粒與內(nèi)參單管檢測，減少孔間干擾。內(nèi)參基因為多拷貝，與端粒量差降低。

3.?方便：操作簡單，無需電泳步驟。

4.?定量： ΔCT 值，可定量檢測端粒相對長度。

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【運輸及保存條件】

低溫冷凍運輸， -20℃保存，有效期 1?年，?凍融以后，4℃保存，有效期4周。

【產(chǎn)品組分】

注：本試劑盒提供試劑，使用前請上下輕柔顛倒十次混勻，后低速離心、小心開啟。避免起泡。

【操作步驟】

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1.?樣品質(zhì)控

使用商業(yè)化DNA抽提試劑盒提取血液、細胞或組織DNA，DNA純度A260/A280≈1.8，檢測樣品濃度標化為15~20ng/μL，上樣4μL。

注：標準品濃度已標化為15~20ng/μL，上樣4μL。樣品及標準品濃度過高或過低會影響擴增效率，對實驗造成干擾，測量結(jié)果誤差較大。

1.?qPCR反應(yīng)體系及條件

反應(yīng)體系以20μL為例

PCR儀設(shè)置以 ABI?7500為例，其他型號定量PCR儀應(yīng)通過標準品進行參數(shù)校正或咨詢專業(yè)技術(shù)人員。

【基線設(shè)置】

內(nèi)參基線設(shè)定：以標準品基線設(shè)定內(nèi)參基線，將內(nèi)參的基線設(shè)定為6~12個循環(huán)。

端粒基線設(shè)定：以標準品基線設(shè)定端粒基線，將端粒的基線設(shè)定為3~7個循環(huán)。

【閾值設(shè)置】

內(nèi)參閾值設(shè)定：以標準品CT值設(shè)定內(nèi)參擴增曲線閾值，將內(nèi)參的CT?值定為17±1。

端粒閾值設(shè)定：以標準品CT值設(shè)定端粒擴增曲線閾值，將端粒的CT?值定為12±1?。

說明：

（1）?如果標準品的內(nèi)參CT?值>25，但陰性對照管的內(nèi)參CT?值正常， 表明試劑盒擴增效率下降或儀器運行障礙。

（2）?如果陰性對照管的內(nèi)參或端粒CT＜25，表明在環(huán)境或加樣過程中存在輕微污染。

備注：

1.?樣本檢測以及標準品的使用應(yīng)做技術(shù)上三重復(fù)，陰性對照做單重復(fù)。

2.?如果檢測樣本為血液DNA，可以將所得端粒相對長度在上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司構(gòu)建的1500例中國人群數(shù)據(jù)庫比對，評估樣本個體端粒的相對長度；若選用其他樣本，建議自行構(gòu)建數(shù)據(jù)庫并做進一步分析。

3. 端粒長度計算方法（T/S）：先分別計算標準品與樣品的ΔCT=CT（端粒）-CT（內(nèi)參）

再計算 T/S=2-(ΔCT(樣品)-ΔCT（標準品）)

注：T為待測樣品，S為標準品，T/S為待測樣品與標準品的端粒相對長度比