Y187酵母感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

Y187菌株是GAL4系統酵母單雜，雙雜實驗用菌株，MATa型，可直接轉化質粒或與MATa型酵母菌株(Y2HGold, AH109等)通過mating操作進行篩庫試驗。Transformation Imarxker為: trpl,leu2，報告基因為: lacZ，MEL1。 Y187有兩個報告基因: lacZ,MEL1，分別由兩種不同的啟動子(G1， M1)啟動，這兩種啟動子只有GAL4識別的17bp核心區相同，其余部分均不同，大大降低了酵母雙雜假陽性發生的概率。Y187感受態細胞經特殊工藝制作，pGADT7質粒檢測轉化效率>10⁴ cfu/ μg DNA。

2.基因型：MAT a，ura3- -52，his3- -200，ade 2-101，trp 1-901， leu 2-3,112，gal4△，met一，ga180△，URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ，MEL1

3.使用說明：

1).取一支無菌的1.5ml EP管，依次加入預冷的目的質粒1-3μg, Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重復一次)，100μl冰上融化的感受態細胞，PEG/LiAc 500ul， 輕輕翻轉混勻6-8次;

2).30℃ 水浴30min，每10min輕輕翻轉混勻6-8次;

3).每支加入20ul的二甲基亞砜; (用于提高轉化效率，可不做)

4).42℃水浴15min，每5min輕輕翻轉混勻6- 8次;

5).12000rpm瞬時離心棄上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃復蘇1h; (用于提高轉化效率， 可不做)

6).12000rpm瞬時離心棄上清，用100ul 0.9% NaCl 重懸，涂板,30℃培養48 - 96h。

4.注意事項：

1). PEG在低溫下易析出，請在常溫下完全溶解后使用。

2).轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

3).同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。

4). Y187酵母菌株對高溫敏感，最適生長溫度為27-30°C;高于31°C，生長速度和轉化效率呈指數下降。

5).菌落變粉不是污染，是酵母細胞生長中一個常見現象。當細胞在平板培養幾天后，平板.上的Adenine被酵母消耗完畢，酵母試圖通過自身代謝途徑合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破壞，Adenine合 成途徑受阻;又由于其ADE4,5,6, 7,8基因均正常，所以造成中間產物P- ri bosy lami noimidazole (AIR)在細胞中積累而使菌落變為粉紅色。

6).酵母在缺陷培養基中生長速度比YPDA培養基慢，培養基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例:涂YPDA平板29°C，48h培養可見直徑1mm克隆;涂SD單缺平板29°C，48-60h培養可見直徑1mm克隆，涂SD雙缺平板29°C，60-80h培養可見直徑1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29'C，80- 90h培養可見直徑1mm克隆。

*本試劑僅供實驗室研究使用