實驗方案

儲備溶液配制

所有未使用的儲備液需分裝為單次用量，于-20°C避光保存，避免反復凍融

Fluo-8FF® AM 儲備液

用高質量無水 DMSO 制備 2 - 5 mM Fluo-8FF® AM 儲備溶液。

工作溶液配制

Fluo-8FF® AM 工作溶液

在實驗當天，將Fluo-8FF AM溶解在DMSO中，或將儲備溶液的等分試樣解凍至室溫。，用含0.04% Pluronic® F-127的緩沖液（如Hanks-Hepes）稀釋至2-20 μM。大多數細胞系，建議使用終濃度為 4-5 μM 的 Fluo-8L® AM。必須需根據細胞類型調整濃度

注意： 1.Pluronic® F-127 可增強 Fluo-8FF® AM 的水溶性。可以從百螢進行購買。

            2.若細胞存在有機陰離子轉運體，建議在工作液中添加1-2 mM丙磺舒（孔內終濃度0.5-1 mM）以防止水解產物外排。多種形式的丙磺舒產品，包括水溶性、鈉鹽和穩定溶液，可從百螢購買。

操作步驟

以下是推薦的將AM酯加載到活細胞中的方案。本方案僅提供指南，實際應根據您的具體需求進行修改。

1.在生長培養基中制備細胞過夜。

2.第二天，將 1X Fluo-8FF® AM 工作溶液添加到孔板中。

注意：如果您的化合物會干擾血清，請在加載染料之前用新鮮的 HHBS 緩沖液替換生長培養基。

3.將加入染料的孔板在37°C的細胞培養箱中培養30至60分鐘。

注意 將染料孵育 2 小時以上可以提高某些細胞系的信號強度。

4.用 HHBS 或您選擇的緩沖液（含有陰離子轉運蛋白抑制劑，例如 1 mM 丙磺舒，如果適用）替換染料工作溶液，以去除多余的探針。

5.根據需要添加刺激物，同時使用配備有 FITC 濾光片組的熒光顯微鏡或 FDSS、FLIPR 或 FlexStation的熒光板讀取器在 490/525 nm 截止波長 515 nm 處檢測熒光。