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在蛋白質研究中，除了 N 端（氨基端）序列外，C 端（羧基端）序列同樣具有重要的生物學信息。C 端蛋白測序是一種專注于解析蛋白質羧基末端氨基酸序列的技術，它能夠揭示蛋白質成熟狀態(tài)、翻譯后修飾（PTMs）、降解模式以及蛋白質功能的關鍵線索。

一、C 端蛋白測序的概念

蛋白質是由氨基酸通過肽鍵連接形成的線性分子鏈，具有兩個端點：

• N 端（氨基端）：通常是信號肽或起始氨基酸所在位置。
• C 端（羧基端）：蛋白質合成完成后的末端，可能帶有多種翻譯后修飾，如羧化、羥基化、羧基甲基化等。

C 端蛋白測序就是針對蛋白質的 C 端序列進行解析和表征的技術。C 端信息對于以下研究尤其重要：

• 蛋白質降解與半衰期研究（如泛素化、蛋白酶切）。
• 翻譯后修飾（如羧基甲基化）分析。
• 蛋白質活性及功能的調控機制。

相比 N 端測序，C 端測序在技術上更具挑戰(zhàn)，但提供了獨特的功能信息，是全面解析蛋白質的重要補充。

二、C 端蛋白測序的發(fā)展歷程

與 N 端測序起源于 Edman 降解類似，早期 C 端測序也基于化學方法，但因化學反應選擇性和效率限制，解析長度有限。隨著質譜技術的快速發(fā)展，現(xiàn)代 C 端測序主要依賴質譜（MS）方法，尤其是 LC-MS/MS 技術。通過特殊的酶解策略和標記技術，可以精準地識別 C 端氨基酸及其修飾，實現(xiàn)高靈敏、高通量分析。

三、C 端蛋白測序的主要方法

1、酶解+質譜策略

C 端蛋白測序的核心挑戰(zhàn)在于如何從完整蛋白中獲得 C 端肽段。常用策略包括：

（1）特異性酶切法

利用特定蛋白酶（如 Carboxypeptidase Y）從蛋白 C 端逐步切割氨基酸。每切除一個氨基酸，通過質譜分析肽段質量變化，推測 C 端序列。

（2）質譜直接分析

通過 LC-MS/MS 對蛋白酶解產(chǎn)物進行分析，利用數(shù)據(jù)庫匹配識別 C 端肽段序列。可結合同位素標記（TMT/iTRAQ） 或 C 端特異性化學衍生，實現(xiàn)定量分析和修飾檢測。這種方法的優(yōu)勢是能夠同時獲取多種信息：序列、翻譯后修飾和肽段豐度，適用于復雜生物樣本。

2、化學衍生法

早期 C 端測序方法依賴化學衍生反應，例如 Carboxypeptidase 反應結合高效液相色譜（HPLC）分析：

• 逐步切除 C 端氨基酸。
• 通過色譜檢測衍生化的氨基酸。
• 循環(huán)進行序列推斷。

盡管歷史悠久，但該方法時間長、靈敏度低、對修飾敏感性有限，如今更多被質譜方法替代。

四、C 端蛋白測序的科研應用

1、蛋白質成熟與降解分析

蛋白質的 C 端信息可以反映蛋白質的成熟狀態(tài)和降解模式。

• 蛋白酶切位點識別：C 端測序可用于確認蛋白質被特定蛋白酶切割的位置，幫助理解蛋白質加工機制。
• 泛素化與蛋白半衰期研究：泛素主要通過 C 端連接靶蛋白，解析 C 端序列可以追蹤蛋白質降解信號。

C 端是許多關鍵修飾的富集區(qū)域，如羧基甲基化、羥基化和乙酰化。通過質譜結合 C 端特異性標記，科研人員可以精準識別 C 端修飾位點，研究修飾對蛋白質功能和信號通路的影響,在疾病相關蛋白分析中發(fā)現(xiàn)潛在標志物。

重組蛋白藥物的 C 端一致性對藥物活性和穩(wěn)定性至關重要。

C 端蛋白測序是解析蛋白質羧基末端序列和修飾的關鍵技術，能夠揭示蛋白質成熟狀態(tài)、翻譯后修飾及降解模式，對基礎科研、藥物開發(fā)和生物標志物研究都具有重要意義。現(xiàn)代質譜方法結合專門的酶切和標記策略，使 C 端測序更高效、靈敏，并可識別復雜修飾。百泰派克生物科技依托先進的質譜平臺、豐富的蛋白質組學經(jīng)驗和專業(yè)的數(shù)據(jù)分析能力，為科研機構和企業(yè)提供高質量、定制化的 C 端測序服務，幫助客戶深入理解蛋白質功能、優(yōu)化藥物研發(fā)及推動科研成果轉化。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對蛋白質序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對蛋白質的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質，提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白質組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種蛋白質標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.專業(yè)生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，最后將原子質量譜數(shù)據(jù)轉換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術先進，填補技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從最小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優(yōu)質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等專業(yè)服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，專業(yè)提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質的生物質譜分析服務!

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