可示蹤qPCR染料法預(yù)混液（低ROX）
產(chǎn)品名稱： 可示蹤qPCR染料法預(yù)混液（低ROX）
英文名稱： 2× Color qPCR Fluore Green Master Mix (Low Rox)
產(chǎn)品編號： N132135
產(chǎn)品價格： null
產(chǎn)品產(chǎn)地： 美國
品牌商標(biāo)： Arcegen
更新時間： 2025-06-12T14:39:32
使用范圍： null
| 規(guī)格 | 價格 |
| 100T（20μL/rxn)-1ml | 150.0 |
| 500T（20μL/rxn)-5ml | 600.0 |
- 聯(lián)系人 : 孟醒
- 地址 : 申江南路4388號1幢2層208室
- 郵編 : 201314
- 所在區(qū)域 : 上海
- 電話 : 189****7703 點擊查看
- 傳真 : 點擊查看
- 郵箱 : cmeng@magibagbio.com
產(chǎn)品簡介
2×Color qPCR Fluore Green Master Mix (Low Rox)是2×實時定量PCR擴增預(yù)溶液，熒光強度高，靈敏度高和特異性強，擴增產(chǎn)量高。核心組分Taq DNA聚合酶采用抗體法熱啟動，可以有效抑制樣品準備過程中引物退火導(dǎo)致的非特異性擴增；還添加了提升PCR反應(yīng)擴增效率因子和均衡不同GC含量（30~70%）基因擴增的促進因子，使定量PCR可以在寬泛的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。
本產(chǎn)品利用不同染料的混合變色反應(yīng)來監(jiān)控移液操作，有效減少了移液誤差的發(fā)生。
產(chǎn)品信息
|
貨號 |
N132135E |
N132135S |
|
規(guī)格 |
100 T（20 μL/rxn） |
500 T（20 μL/rxn） |
組分信息
|
組分編號 |
組分名稱 |
N132135E |
N132135S |
|
N132135-A |
2×Color qPCR Master Mix (Low Rox) |
1 mL |
5×1 mL |
|
N132135-B |
10×Dilution Buffer |
1 mL |
1 mL |
儲存條件
-25~-15℃避光保存，有效期1年。
注意事項
1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 解凍后Master Mix可能出現(xiàn)絮狀或白色沉淀，手握緩慢溶解并上下輕柔顛倒混勻至溶液澄清，不影響試劑性能。
3. 使用前請上下顛倒以混勻Master Mix，請勿vortex避免產(chǎn)生氣泡，影響定量結(jié)果。Master Mix經(jīng)混勻短暫離心后即可使用。加樣過程中吹打要輕，如果操作不慎Master Mix起泡，需再次離心方可使用。
4. 由于本品檢測靈敏度極高，易被空氣中氣溶膠污染。因此反應(yīng)體系配制時請于超凈工作臺內(nèi)進行，配制過程中請使用滅菌槍頭、反應(yīng)管，條件容許的實驗室推薦使用專用的移液槍和帶濾芯的槍頭。
5. 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒（Cat#N132062），以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
6. 本產(chǎn)品僅用于科研。
使用說明
1. 模板處理
2×Color qPCR Fluore Green Master Mix (Low Rox)中包含藍色染料，10×Dilution Buffer為專用黃色濃縮模板稀釋液。使用過程中，如需要進行模板示蹤，則需稀釋到1X作為模板稀釋液使用，然后進行qPCR檢測；如不需要進行模板示蹤，則不使用Dilution Buffer即可。
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模板類型 |
10×Dilution Buffer使用方式* |
Dilution Buffer終濃度 |
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cDNA溶液、溶解的質(zhì)粒、基因組 |
若要稀釋模板，則先使用無菌超純水將模板稀釋至目標(biāo)濃度，后在每9 μL模板中加入1 μL 10×Dilution Buffer。 |
1× |
|
DNA粉末 |
使用無菌超純水將10×Dilution Buffer 稀釋至1×，使用合適體積的1×Dilution Buffer作溶劑溶解對應(yīng)的DNA粉末。 |
1× |
【注】：*實際使用過程中也可按需使用其他方案，保證最終模板中Dilution Buffer濃度為1×即可。
2. 推薦qPCR反應(yīng)體系
|
組分 |
體積 （μL）*** |
體積 （μL）*** |
終濃度 |
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2×Color qPCR Master Mix (Low Rox) |
25 |
10 |
1× |
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Forward Primer (10 μM)* |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
|
Reverse Primer (10 μM)* |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
|
模板DNA/cDNA** |
x |
x |
- |
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無菌超純水 |
Up to 50 |
Up to 20 |
- |
【注】：
*通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM之間進行調(diào)整。
**如模板為未稀釋cDNA原液，使用體積不應(yīng)超過qPCR反應(yīng)總體積的1/10，最佳模板加入量以保證擴增得到的Ct值在20-30個循環(huán)為宜。
***推薦使用20 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復(fù)性；上機前需充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
3. 反應(yīng)程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
|
預(yù)變性 |
95℃ |
2 min |
1 |
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變性 |
95℃ |
10 sec |
40 |
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退火/延伸* |
60℃ |
30 sec** |
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熔解曲線階段* |
儀器默認設(shè)置 |
1 |
|
【注】：
*退火溫度和時間：請根據(jù)引物TM值和目的基因的長度進行調(diào)整。
**熒光信號采集：請勿忘記打開熒光信號采集，按照儀器使用說明書要求進行實驗程序設(shè)置。
***熔解曲線：通常情況下可以使用儀器默認程序。
4. 引物設(shè)計指南
1) 推薦引物長度25 bp左右。擴增產(chǎn)物長度150 bp為佳，可以在100 bp-300 bp內(nèi)選擇。
2) 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。
3) 引物堿基分布均勻，避免出現(xiàn)連續(xù)的4個相同堿基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一個堿基最好為G或C。
4) 引物內(nèi)部或者正反兩條引物間最好避免出現(xiàn)有3個堿基以上的互補序列。
5) 引物特異性需要用NCBI BLAST程序進行核對。避免引物 3’端有2個堿基以上的非特異性互補。
6) 設(shè)計完成的引物需要進行擴增效率的檢測，只有具備相同擴增效率的引物才可用于定量比較分析。
5. 適用機型
本產(chǎn)品中預(yù)混了用以校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差的ROX Reference Dye 2 (低濃度)，適用于以下熒光定量PCR儀：
Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7;
Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P；
以及其他需要添加低濃度ROX Reference Dye的熒光定量PCR儀。