GeneCopoeia提供病毒和非病毒載體的人、小鼠和大鼠全基因組OmicsLink™ shRNA表達克隆，shRNA序列經專利算法設計包括莖（19-29對核苷酸）和環，確保高效的抑制作用和最低的脫靶效應。

shRNA抑制效率保證

對于構建到慢病毒和哺乳動物載體的shRNA克隆，我們針對每個基因提供3個克隆，在靶細胞的轉染效率達到85%以上的情況下，保證至少有1個克隆通過qRT-PCR檢測對靶基因的表達抑制水平達到70%以上。

靶向任意細胞

使用慢病毒和非病毒載體系統，既可以轉染或轉導shRNA進入常規的分裂細胞，也可以進入難轉染的非分裂細胞，如原代細胞、神經元細胞等。

靈活的載體選擇

每個shRNA克隆提供5 µg純化質粒，也提供客戶定制的慢病毒載體的shRNA克隆。定制該克隆，請填寫表格。

標簽及報告基因

載體中帶有的mCherry和eGFP報告基因可以用于監測轉染和轉導效率，嘌呤霉素標記可用于穩定細胞系的篩選。

全長測序的表達框架

載體的插入序列已經過測序，包括啟動子、編碼shRNA的正義和反義鏈、發夾結構、終止子和其他接頭序列。

產品應用

基因表達下調 — 以包含無義序列的克隆為對照，研究shRNA克隆對單個基因表達的下調效果。在每個shRNA克隆訂單中贈送對照克隆。

信號通路研究 — 我們將克隆按照不同的信號傳導、代謝、疾病通路、基因家族等進行了分類，并將已知同一通路的shRNA表達克隆以96孔或384孔板的形式排列在一起，可一次研究一組基因在某一信號通路中的功能。目前我們提供針對人類全部激酶基因的shRNA表達克隆，并已按照按不同激酶的功能進行了分類。

靶點及功能驗證 — OmicsLink™ ORF表達克隆和在shRNA靶序列帶有沉默突變的ORF表達克隆一起使用可用于shRNA靶點驗證和基因功能拯救研究。

圖2. shRNA抑制基因表達的機制

qRT-PCR — shRNA克隆的表達能導致靶標基因所轉錄的mRNA被切割和降解，從而降低蛋白的表達量。所以推薦檢測表達抑制效率的第一步是qRT-PCR。GeneCopeia提供驗證過的對應靶標基因和其他已報導的轉錄本的qRT-PCR引物。

Western Blot檢測 — 大部分情況下，檢測shRNA對基因表達的抑制效率需要用Western Blot方法來檢測蛋白表達水平。

功能檢測 — 檢測表達抑制效率還可用生物和生化的終點分析方法，如細胞增殖、克隆形成、細胞周期、細胞遷移等。

報告基因檢測表達水平 — 當研究的靶標基因內源轉錄水平很低，且不適宜使用qRT-PCR和WB檢測時，表達抑制效率的檢測也可通過共轉導shRNA克隆和一個含靶標基因并帶了報告基因的表達克隆，檢測報告基因的表達水平即可。靶基因的mRNA遭shRNA的破壞，同時導致了報告基因的mRNA遭破壞，從而表現為報告蛋白的表達量下降。因而表達抑制效率可以用報告蛋白的酶活性分析結果來進行量化。