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基因合成/DNA提取純化/QPCR/ChIP服務(wù)

基因合成

實(shí)驗(yàn)室通常用PCR和RT－PCR的方法來獲取某個(gè)基因片段，但是往往因?yàn)闃?biāo)本和模板等原因無法釣取該段基因。如今，我們采用化學(xué)合成的方法人工構(gòu)建基因片段，即：全基因合成拼接技術(shù)。可以為廣大的科研朋友服務(wù)。

基因合成是指在體外合成雙鏈DNA分子的一門技術(shù),與寡核苷酸合成有所不同，寡核苷酸是單鏈的，所能合成的最長(zhǎng)片段僅為100nt左右，而基因合成則為雙鏈DNA分子合成，所能合成的長(zhǎng)度范圍50bp-12 kb。可根據(jù)客戶需求，我中心可以提供全基因合成服務(wù)，速度快、周期短、價(jià)格優(yōu)惠。合成的基因可以根據(jù)客戶的需求連接到不同的載體上，最終提供的產(chǎn)品包括菌株以及凍干的質(zhì)粒和全基因完整的測(cè)序報(bào)告。

全基因合成的適用范圍：

A: 自然界中無法以常規(guī)實(shí)驗(yàn)手段得到的基因

B:研究人員通過自己的意愿設(shè)計(jì)基因序列,以得到自然界中不存在的基因

C:對(duì)已知基因序列進(jìn)行大量密碼子優(yōu)化重排,以期達(dá)到對(duì)該基因進(jìn)行高效表達(dá)或獲得新的生物特性等研究目的

服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

A:合成基因最長(zhǎng)已達(dá)到10.5KB,已完成基因超過10000條
B:可以合成重復(fù)序列(重復(fù)次數(shù)無限制).高GC(小于80%).發(fā)夾(參照每200bp小于3個(gè)發(fā)夾為限).連續(xù)單一堿基重復(fù)(GC小于15個(gè),AT小于20個(gè))等富含特殊結(jié)構(gòu)的基因
注:特殊結(jié)構(gòu)基因合成的相關(guān)數(shù)據(jù)是根據(jù)我公司曾經(jīng)成功合成過的基因序列所做的總結(jié),以作為您設(shè)計(jì)基因序列時(shí)判斷是否能順利合成作為參考,具體還需以實(shí)際基因序列來定
C:基因可以克隆到客戶提供或指定的表達(dá)載體上
D:免費(fèi)提供基因結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì).基因密碼子優(yōu)化,基因克隆表達(dá)方案設(shè)計(jì)等基因合成相關(guān)咨詢服務(wù).

全基因合成操作程序：

1、我們將對(duì)您需要合成的基因全序列進(jìn)行分析，檢查基因內(nèi)部是否含有重復(fù)序列，然后根據(jù)序列的具體情況設(shè)計(jì)合成方案。

2、在得到您認(rèn)可后，我們將立即進(jìn)行單鏈Oligo DNA 合成，DNA片段拼接等工作。然后把全長(zhǎng)基因克隆到載體中，再通過DNA測(cè)序確認(rèn)合成基因的正確性。

3、測(cè)序結(jié)果如果發(fā)現(xiàn)有錯(cuò)誤位點(diǎn)，我們會(huì)采取相應(yīng)的技術(shù)手段進(jìn)行修復(fù)校對(duì)，保證整個(gè)序列的正確性。

服務(wù)要求：

• 請(qǐng)您以EMAIL的形式提供需要合成的基因的序列。

• 請(qǐng)您說明實(shí)驗(yàn)的具體要求：如：使用何種酶切位點(diǎn)，進(jìn)行克隆，以及需要克隆到何種載體等。

• 本中心將免費(fèi)提供PUC57－T載體，如果需要裝在其它載體中，請(qǐng)客戶自已提供。

結(jié)果提供：

A: 基因合成報(bào)告單一份
B: 含目的基因的質(zhì)粒(不少于1ug)一份
C: 含目的基因的菌株一份
D：基因合成的測(cè)序圖譜一份

QPCR檢測(cè)

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而獲得目的基因或檢測(cè)基因表達(dá)。RT-PCR使RNA檢測(cè)的靈敏性提高了幾個(gè)數(shù)量級(jí)，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術(shù)主要用于：分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構(gòu)建RNA高效轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。

操作步驟：
1、RNA提取并除去RNA中的基因組DNA污染
2、第一鏈cDNA的合成
3、用目的基因的上下游引物進(jìn)行PCR反應(yīng)
4、瓊脂糖上進(jìn)行凝膠電泳
5、成像分析軟件Quantity One進(jìn)行半定量
PCR條件的優(yōu)化：
PCR條件的優(yōu)化主要是①引物退火溫度的調(diào)節(jié)，一般在引物設(shè)計(jì)軟件推薦溫度的上下2 ℃變化尋找最佳退火溫度。②此外Mg2＋濃度的調(diào)節(jié)也非常重要，通常最佳濃度為2mM左右。③引物和模板的量等。?
實(shí)驗(yàn)要求：
1、請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料，或直接提供純化好的總RNA或DNA（大于5ug/樣本）。如是如織：100－200mg
2、請(qǐng)通過EMAIL提供已知的全長(zhǎng)基因序列。
3、請(qǐng)?zhí)峁┰敿?xì)背景資料：DNA/RNA來源，豐度。
4、在實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)您要確保目的基因可以表達(dá)，并確保您提供的實(shí)驗(yàn)信息的準(zhǔn)確性。
服務(wù)承諾：
1.本公司會(huì)在最短的時(shí)間內(nèi)快速將實(shí)驗(yàn)完成。????
2.本公司保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、客觀、可信。
3. 本公司保證不對(duì)外公開或不向第三方提供客戶相關(guān)信息。
結(jié)果提供：
1、實(shí)驗(yàn)詳細(xì)步驟，和相關(guān)數(shù)據(jù)。
2、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)圖片（含軟件分析結(jié)果）

ChIP服務(wù)

染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于體內(nèi)分析發(fā)展起來的方法，也稱結(jié)合位點(diǎn)分析法，在過去十年已經(jīng)成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項(xiàng)技術(shù)幫助研究者判斷在細(xì)胞核中基因組的某一特定位置會(huì)出現(xiàn)何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。近年來，這種技術(shù)得到不斷的發(fā)展和完善。采用結(jié)合微陣列技術(shù)在染色體基因表達(dá)調(diào)控區(qū)域檢查染色體活性，是深入分析癌癥、心血管疾病以及中央神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等疾病的主要通路的一種非常有效的工具。

操作流程：

1.甲醛處理細(xì)胞固定
2.收集細(xì)胞，超聲破碎，凝膠電泳檢測(cè)超聲片段大小，估計(jì)樣本DNA濃度。
3.加入目的蛋白的抗體，與靶蛋白-DNA復(fù)合物相互結(jié)合
4.加入ProteinA/proteinG瓊脂珠或磁珠，結(jié)合抗體-靶蛋白-DNA復(fù)合物，IP反應(yīng)
5.對(duì)沉淀下來的復(fù)合物進(jìn)行清洗，除去非特異性結(jié)合
6.洗脫，得到富集的靶蛋白-DNA復(fù)合物
7.解交聯(lián)，純化富集的DNA-片斷
8.對(duì)富集得到的DNA片段進(jìn)行QPCR反應(yīng)

威斯騰服務(wù)流程

威斯騰生物服務(wù)項(xiàng)目