基因合成/DNA提取純化/QPCR/ChIP服務

基因合成

實驗室通常用PCR和RT－PCR的方法來獲取某個基因片段，但是往往因為標本和模板等原因無法釣取該段基因。如今，我們采用化學合成的方法人工構建基因片段，即：全基因合成拼接技術?？梢詾閺V大的科研朋友服務。

基因合成是指在體外合成雙鏈DNA分子的一門技術,與寡核苷酸合成有所不同，寡核苷酸是單鏈的，所能合成的最長片段僅為100nt左右，而基因合成則為雙鏈DNA分子合成，所能合成的長度范圍50bp-12 kb?？筛鶕蛻粜枨?，我中心可以提供全基因合成服務，速度快、周期短、價格優惠。合成的基因可以根據客戶的需求連接到不同的載體上，最終提供的產品包括菌株以及凍干的質粒和全基因完整的測序報告。

全基因合成的適用范圍：

A: 自然界中無法以常規實驗手段得到的基因

B:研究人員通過自己的意愿設計基因序列,以得到自然界中不存在的基因

C:對已知基因序列進行大量密碼子優化重排,以期達到對該基因進行高效表達或獲得新的生物特性等研究目的

服務優勢：

A:合成基因最長已達到10.5KB,已完成基因超過10000條
B:可以合成重復序列(重復次數無限制).高GC(小于80%).發夾(參照每200bp小于3個發夾為限).連續單一堿基重復(GC小于15個,AT小于20個)等富含特殊結構的基因
注:特殊結構基因合成的相關數據是根據我公司曾經成功合成過的基因序列所做的總結,以作為您設計基因序列時判斷是否能順利合成作為參考,具體還需以實際基因序列來定
C:基因可以克隆到客戶提供或指定的表達載體上
D:免費提供基因結構設計.基因密碼子優化,基因克隆表達方案設計等基因合成相關咨詢服務.

全基因合成操作程序：

1、我們將對您需要合成的基因全序列進行分析，檢查基因內部是否含有重復序列，然后根據序列的具體情況設計合成方案。

2、在得到您認可后，我們將立即進行單鏈Oligo DNA 合成，DNA片段拼接等工作。然后把全長基因克隆到載體中，再通過DNA測序確認合成基因的正確性。

3、測序結果如果發現有錯誤位點，我們會采取相應的技術手段進行修復校對，保證整個序列的正確性。

服務要求：

• 請您以EMAIL的形式提供需要合成的基因的序列。

• 請您說明實驗的具體要求：如：使用何種酶切位點，進行克隆，以及需要克隆到何種載體等。

• 本中心將免費提供PUC57－T載體，如果需要裝在其它載體中，請客戶自已提供。

結果提供：

A: 基因合成報告單一份
B: 含目的基因的質粒(不少于1ug)一份
C: 含目的基因的菌株一份
D：基因合成的測序圖譜一份

QPCR檢測

逆轉錄-聚合酶鏈反應(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術主要用于：分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構建RNA高效轉錄系統。

操作步驟：
1、RNA提取并除去RNA中的基因組DNA污染
2、第一鏈cDNA的合成
3、用目的基因的上下游引物進行PCR反應
4、瓊脂糖上進行凝膠電泳
5、成像分析軟件Quantity One進行半定量
PCR條件的優化：
PCR條件的優化主要是①引物退火溫度的調節，一般在引物設計軟件推薦溫度的上下2 ℃變化尋找最佳退火溫度。②此外Mg2＋濃度的調節也非常重要，通常最佳濃度為2mM左右。③引物和模板的量等。?
實驗要求：
1、請您提供新鮮的且盡量多的材料，或直接提供純化好的總RNA或DNA（大于5ug/樣本）。如是如織：100－200mg
2、請通過EMAIL提供已知的全長基因序列。
3、請提供詳細背景資料：DNA/RNA來源，豐度。
4、在實驗前請您要確保目的基因可以表達，并確保您提供的實驗信息的準確性。
服務承諾：
1.本公司會在最短的時間內快速將實驗完成。????
2.本公司保證檢測結果準確、客觀、可信。
3. 本公司保證不對外公開或不向第三方提供客戶相關信息。
結果提供：
1、實驗詳細步驟，和相關數據。
2、完整的實驗報告實驗圖片（含軟件分析結果）

ChIP服務

染色質免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于體內分析發展起來的方法，也稱結合位點分析法，在過去十年已經成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項技術幫助研究者判斷在細胞核中基因組的某一特定位置會出現何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測體內反式因子與DNA的動態作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關系。近年來，這種技術得到不斷的發展和完善。采用結合微陣列技術在染色體基因表達調控區域檢查染色體活性，是深入分析癌癥、心血管疾病以及中央神經系統紊亂等疾病的主要通路的一種非常有效的工具。

操作流程：

1.甲醛處理細胞固定
2.收集細胞，超聲破碎，凝膠電泳檢測超聲片段大小，估計樣本DNA濃度。
3.加入目的蛋白的抗體，與靶蛋白-DNA復合物相互結合
4.加入ProteinA/proteinG瓊脂珠或磁珠，結合抗體-靶蛋白-DNA復合物，IP反應
5.對沉淀下來的復合物進行清洗，除去非特異性結合
6.洗脫，得到富集的靶蛋白-DNA復合物
7.解交聯，純化富集的DNA-片斷
8.對富集得到的DNA片段進行QPCR反應

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