人血管內皮細胞生長因子（VEGF）ELISA 試劑盒
英文名稱：Human Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA kit
保存溫度：2-8℃，避光保存
產品規格：96T/48T
有效期： 6個月
人血管內皮細胞生長因子（VEGF）ELISA 試劑盒

操作流程
1. 加入10 μL 校準品、質控品、待測樣品到反應板孔內；
2. 加入100 μL酶標抗體工作液到反應板孔內；
3. 室溫搖床溫育120 min；
4. 洗板6次；
5. 加入1X底物工作液100 μL；
6. 室溫溫育15 min；
7. 加入100 μL終止液，搖勻約5 s；
8. 用波長325 nm/420 nm的激發/發射光檢測
人血管內皮細胞生長因子（VEGF）ELISA 試劑盒
ELISA 試驗時，注意事項如下：
1.　正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。
???? 有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2.　在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1）　固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。
???? 其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：
???? 用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。
?? 吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定：
?? 即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后,在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。
?? 選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg／ml。
（3）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。
??? 然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）
??? 在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。
?? 有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，
??? 應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入.

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