CRISPR基因敲除試劑盒
產(chǎn)品名稱： CRISPR基因敲除試劑盒
英文名稱： CRISPR
產(chǎn)品編號(hào)： Cas9x3.0
產(chǎn)品價(jià)格： 0
產(chǎn)品產(chǎn)地： 蘇州
品牌商標(biāo)： HyCyte™
更新時(shí)間： null
使用范圍： null
- 聯(lián)系人 :
- 地址 : 太倉(cāng)市開發(fā)區(qū)
- 郵編 : 215300
- 所在區(qū)域 : 江蘇
- 電話 : 131****7797 點(diǎn)擊查看
- 傳真 : 點(diǎn)擊查看
- 郵箱 : hfx@dingbio.com
|?產(chǎn)品介紹
CRISPR基因敲除試劑盒(Cas9x3.0)是海星生物在多年基因編輯服務(wù)的基礎(chǔ)上研發(fā)的高效快捷的基因敲除試劑盒。包括了人(Human)和小鼠(Mouse)的所有基因的敲除。
Cas9x3.0試劑盒包含2個(gè)Cas9X?算法優(yōu)化的gRNA序列載體和特異的同源DN**段，DN**段含有抗性和GFP熒光，并攜帶有一段特殊同源序列，不僅可為后續(xù)基因敲除細(xì)胞的篩選提供藥物抗性，也可以通過流式篩選獲得敲除細(xì)胞。
Cas9x3.0試劑盒對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞都有非常高的敲除效率。
|?產(chǎn)品特點(diǎn)
敲除高效率——比病毒敲除方式更實(shí)惠、更穩(wěn)定、更安全
實(shí)驗(yàn)超簡(jiǎn)單——操作流程簡(jiǎn)單，能養(yǎng)好細(xì)胞就能做基因敲除
|?產(chǎn)品構(gòu)成
|?產(chǎn)品原理
CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)依據(jù)HDR和NHEJ修復(fù)原理進(jìn)行產(chǎn)品開發(fā)。
優(yōu)化的gRNA引導(dǎo)Cas9蛋白對(duì)特定位點(diǎn)進(jìn)行切割，產(chǎn)生DNA雙鏈斷裂（Double-Strand Break, DSB），并誘導(dǎo)同源線性化DN**段（攜帶抗性基因和熒光基因）整合到該位點(diǎn)，再通過抗性藥物（puroR）或熒光（GFP）進(jìn)行篩選，從而獲得基因敲除的細(xì)胞和單克隆。
CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0) 的敲除效率是傳統(tǒng)基因敲除策略的2~5倍。因?yàn)槠洫?dú)有的敲除策略是通過在基因位導(dǎo)入Donor DNA（ puroR & GFP ）從而達(dá)到敲除目的蛋白效果，同時(shí)也可以在DSB位點(diǎn)導(dǎo)入序列移碼，導(dǎo)致蛋白翻譯提前終止。這兩個(gè)原理的疊加，可以輕松獲得“等位基因”純合敲除細(xì)胞株。
|?應(yīng)用流程
CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)操作步驟(脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法)：
本試劑盒建議采用轉(zhuǎn)染試劑是Lipofectamine? 2000 Reagent (cat#11668-030)，具體參照轉(zhuǎn)染試劑說明材料。不同類型的轉(zhuǎn)染試劑，請(qǐng)按照制造商的操作說明進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
注意：懸浮細(xì)胞不推薦使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法。
CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)操作步驟(電轉(zhuǎn)化法)：
本試劑盒推薦Neon轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，具體參照設(shè)備對(duì)每種細(xì)胞參數(shù)。不同類型的電轉(zhuǎn)設(shè)備，請(qǐng)按照制造商的操作說明進(jìn)行優(yōu)化。
注意：懸浮細(xì)胞推薦使用電轉(zhuǎn)化法。
CRISPR基因敲除試劑盒 (Cas9x3.0)配有eGFP對(duì)照DNA，可以按照實(shí)際使用的方法和細(xì)胞情況，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)摸索，建議48小時(shí)后的目的細(xì)胞的eGFP的陽(yáng)性率不低于50%， Cas9x3.0試劑盒才能獲得最佳敲除效果。
