?使用說明：

1.儀器安裝
1)產品開箱檢查：請小心打開包裝箱，對照“裝箱清單”清點箱內物品，確認所有部件齊全。如有任何零件丟失，請及時聯系碧云天。檢查所有零部件是否在運輸途中受到損壞，如果有任何零件受損，請立即聯系承運商，進而確保第一時間向承運商聲明零件有所損壞，若有需要則讓承運商及時運回碧云天。
2)注意事項：
a.請勿在儀器主機電源開關開啟的狀態下通上電源(“o”按下表示關機，“-”按下表示開機)。
b.請勿把儀器主機放置在潮濕、多灰塵或是高溫的地方。
c.將儀器主機放置在平穩的桌面上。
d.在儀器主機周圍留出至少10厘米的空地以便空氣流通和散熱。
3)儀器安裝：
a.將電源線的一端與儀器主機的電源接口相連，另一端插入電源插座中。
b.將USB線的一端與儀器主機USB 3.0接口相連，另一端與電腦主機的USB 3.0接口連接。
c.將軟件狗插到儀器主機左側的USB 2.0接口或待安裝軟件電腦的USB 2.0接口上。
2.軟件安裝
1)軟件概述：
a.本儀器配套軟件包括圖像采集軟件“BeyoImager Imaging System”及圖像分析軟件“BeyoImager Image Analyzer”。
b.圖像采集軟件“BeyoImager Imaging System”可對圖像采集系統進行控制，搭載創新的人機交互功能，具有精確的軟件自動曝光功能，無需揣摩曝光時間，實現一鍵成像。同時可將膜與化學發光圖像疊加并且自動生成三種不同效果的化學發光圖像。
c.圖像分析軟件“BeyoImager Image Analyzer”主要用于Western Blot結果的半定量分析。
2)軟件安裝步驟：
a.在電腦上插入含安裝軟件的16GB U盤，雙擊U盤中的安裝包“BeyoImager? Imaging System.exe”，進行軟件的安裝。
b.選擇語言，推薦使用簡體中文，點擊“確定”按鈕。

c.出現“安裝向導”，選擇“下一步”繼續安裝向導。

d.選擇安裝路徑以安裝圖像采集軟件和圖像分析軟件。默認安裝路徑為“C:\Program Files\BeyoImager Imaging System”，可直接修改路徑，或通過“瀏覽”選擇新的安裝路徑。確定后，點擊“下一步”。

e.選擇開始菜單以創建程序快捷方式。默認的開始菜單文件夾名稱為“BeyoImager”，可直接修改文件夾名，或通過“瀏覽”選擇文件夾。確定后，點擊“下一步”。

推薦使用默認的安裝選項，選擇安裝驅動，并點擊下一步?！皠摻ㄗ烂婵旖莘绞健睂⒎奖闶褂孟嚓P軟件，而“安裝驅動”是必選項。

f.點擊“安裝”開始軟件的安裝。

g.總是點擊“下一步”，并信任安裝。





h.點擊“完成”進入下一個窗口，點擊“結束”安裝完成軟件。

3)軟件圖標：軟件安裝完畢后，如果在安裝軟件的時候同意“創建桌面快捷方式”，則會在桌面上生成用于圖像采集的“BeyoImager Imaging System”及圖像分析的“BeyoImager Image Analyzer”兩個快捷方式，如下圖所示：

4)第一次使用軟件時，可能會出現“Windows安全中心警報”，請點擊“允許訪問”。

5)安裝結束后，某些殺毒軟件或安全軟件可能會阻止軟件的使用，表現為軟件圖標異常，或不能打開圖像采集軟件或分析軟件。此時只需要先退出殺毒軟件或安全軟件，再重新安裝。安裝結束后再重新啟用殺毒軟件或安全軟件。如果擔心有安全問題，可以在安裝軟件過程中，暫時關閉網絡。
3.圖像采集軟件“BeyoImager Imaging System”的使用
1)打開采集軟件“BeyoImager Imaging System”前，先按下儀器后面右側的開關，開啟儀器，此時顯示的軟件首頁界面如下圖，并顯示相機已連接，控制器已連接：

如果只打開軟件，軟件會檢測不到相機和控制器，此時打開儀器開關，點擊“單擊此處重新查找”即可。

2)圖像采集軟件“化學發光”功能的主界面：
點擊“化學發光”，出現如下“化學發光”的主界面，主界面共可分為5個次界面：包含左上側的“保存路徑”的選擇和“實驗結果”命名界面，中上側的“高分辨率”和“高靈敏度”選擇界面，右側的“拍攝”菜單按鍵功能表界面，中間的“拍攝預覽”界面和下側的“拍攝模式”設置界面。

3)“保存路徑”的選擇和“實驗結果”命名界面：本界面用于實驗結果的保存路徑選擇和實驗結果的命名。

a.“保存路徑”的選擇：在“拍攝預覽”界面的上方(如上圖所示)，點擊中間的打開按鈕選擇拍攝結果的保存路徑或直接修改路徑。拍攝完畢后，軟件會在所指定的路徑下自動生成一個文件夾，文件夾名稱為拍攝圖片時的日期，如“2019-12-31”，子文件夾自動根據軟件開啟的次數以數字命名，如11、12等。
b.“實驗結果”的命名：在“拍攝預覽”界面的上方(如上圖所示)，在右側“實驗結果”的輸入框中鍵入實驗結果名稱。拍攝完畢后，軟件將生成一個CLX文件，其命名規則為：“實驗結果名稱_生成日期_生成時間_曝光時間”。例如：實驗結果名稱為“GAPDH”，拍攝日期是2019年12月31日，拍攝時間是8點09分56秒，曝光時間為1秒，則文件名為“GAPDH_191231_080956_00.01.000.clx”。 CLX文件是原始文件，包含所有信息。
4)“高分辨率”和“高靈敏度”選擇界面：
如果化學發光比較強，建議選擇“高分辨率”模式，此時像素點多，分辨率(解析度)高；如果化學發光比較弱，可以嘗試“高靈敏度”模式，此時軟件自動通過像素合并技術以增強靈敏度，但分辨率會有損失。當化學發光比較弱而又對圖片有分辨率要求時，建議通過增加上樣量、提高一抗二抗的濃度或使用更靈敏的化學發光試劑來提高發光強度。本軟件默認為“高分辨率”模式，并通常建議使用“高分辨率”模式進行圖像的采集。
5)“拍攝”菜單按鍵功能表界面

6)“拍攝預覽”界面：
“拍攝預覽”界面可實時觀察樣品情況，用于焦距的微調，并可通過預覽曝光時間的調節而調整實時畫面的亮度。
7)“拍攝模式”設置界面：本界面位于“拍攝預覽”下方，用于化學發光的曝光時間和拍攝模式的設置，包括：“多幀拍攝”、“自動單張”和“手動單張”三種模式。建議先自動單張，儀器會自動計算曝光時間，再根據曝光效果，確定大致曝光時間進行手動單張。

a.多幀拍攝：點擊多幀拍攝，可以選擇三種方式：“灰度累積”、“自定時間”及“時間累積”。
(a)灰度累積

幀數： 設定所需拍攝的次數；
曝光時間： 設定每一次拍攝所需的曝光時間。
在“灰度累積”方式下，每次拍攝所獲取的灰度會相疊加，從而提高信號強度。
舉例說明：
如上圖所示，設定幀數為4，曝光時間為1秒。儀器會自動拍攝4次，每一次曝光時間均為1秒。第一張為1秒，第二張曝光時間為1秒，并疊加第一次的1秒曝光時間的結果，最后一張疊加實際為4張曝光時間為1秒的疊加結果。
注：如果4次拍攝均未獲取信號，則最終疊加的圖像為一片黑色，即：沒有獲得信號。
(b)自定時間

此方式下，我們可以設定每一次曝光的時間， 左側時間欄的數量即為圖片數量。 我們可在最右側輸入“分、秒、毫秒”， 點擊下方“新增”按鈕后， 左側時間欄中便會新增一個曝光時間。 如需更改每一張圖片的曝光時間，我們可點擊時間欄中的時間，在右側輸入所需的曝光時間后，點擊“修改”按鈕即可。
系統提供4種方案可以設定，便于用戶記錄自己的拍攝習慣。
舉例說明：
如上圖所示：設定曝光時間分別為：10秒、20秒、30秒、1分、2分。在點擊“確定”后，多幀拍攝會被選中。點擊拍攝后，總共會拍攝5張圖片，曝光時間分別與之對應。
(c)時間累積

此方式下，我們首先通過設定“幀數”來確定所需拍攝的圖片數量。初始時間為第一張圖片的曝光時間。累積時間則表示之后每一張圖片的間隔時間。
舉例說明：
如上圖所示： 首先我們設定“幀數”為3，這意味著我們將拍攝的圖片張數為3。初始時間為30毫秒，累積時間為5秒， 那么這三張圖片的曝光時間分別為：
第一張 00秒30毫秒
第二張 05秒30毫秒
第三張 10秒30毫秒
在設定多幀拍攝的3種方式(“灰度累積”、“自定時間”或“時間累積”)后，點擊確定按鈕，即可開啟多幀拍攝模式，隨后點擊最右側“拍攝”按鈕，系統會根據所設參數進行樣品的拍攝，并將結果自動保存在所指定的文件夾里。
b.自動單張

點擊“自動單張”進入此拍攝方式。隨后點擊最右側“拍攝”按鈕，系統會自動計算曝光時間，并將結果自動保存在所指定的文件夾里。
c.手動單張

點擊“手動單張”進入此拍攝方式。此時，按鈕右側的時間輸入框會亮起。手動輸入時間后，點擊最右側“拍攝”按鈕，系統會根據所輸入的曝光時間進行樣品的拍攝，并將結果自動保存在所指定的文件夾里。
8)拍攝界面：
設置好拍攝參數，點擊“拍攝”按鈕，即啟動拍攝程序，得到如下的拍攝界面。其中左上角是膜與化學發光圖像疊加的圖像，另外三張是系統自動生成三種不同效果的化學發光圖像。 單擊任何一張圖像即可打開該圖像，并對圖像進行調節和保存，詳見“4. 圖像的導入、打開、保存和導出”相關的介紹。

4.圖像的導入、打開、保存和導出
1)圖像的導入界面：在軟件首頁點擊右下方“打開圖片”即可打開圖像的導入界面。本功能在未連接儀器時也能操作：

2)圖像的導入：在圖像導入界面中，通過“導入”選項導入已保存圖像的文件夾，導入后根據圖像拍攝的時間點擊“本次”、“本日”、“本周”、“本月”或“更早”找到相應圖像。如果一個母文件夾包含很多子文件夾，需要顯示全部子文件夾中的圖像，此時可以直接導入母文件夾。注：本圖像采集軟件僅支持由本儀器采集的CLX圖像文件的導入。

3)圖像的打開：選中相應的圖片使文件名高亮，如上圖。雙擊或點擊打開即可打開圖像，如下圖，包含膜與化學發光圖像自動疊加圖片及自動生成三種不同效果的化學發光圖像。注意：打開圖像僅高亮即可，樣品名前面打鉤用于圖像的導出。

4)圖像的調節和保存：單擊任何一張圖像即可打開該圖像，再次單擊圖像可退出。圖像可進行Low和High值的調整(具體參考“5.圖像分析軟件“BeyoImager Image Analyzer”的使用”中的“灰度顯示范圍的調整”)，由于軟件會生成膜與化學發光圖像疊加的圖像，并且會自動生成三種不同效果的化學發光圖像，選擇一張合適的即可進行保存，一般不建議調整Low和High值，除非是自動生成的化學發光圖像還是不滿意。

5)圖像的導出：圖像導入后，可以在樣品名前面的復選框打鉤(可多選)直接進行導出，導出內容可選擇化學發光圖或真實的白光圖(可多選)，導出格式可以為16位TIFF、24位TIFF、JPEG、Bitmap或原始文件等多個選項(每次僅單選)。
6)圖像的刪除：對于不合適的圖像可以直接刪除。注意：刪除的圖像不可還原。
7)返回：各個界面的返回鍵，點擊后可以返回上一個界面。
5.圖像分析軟件“BeyoImager Image Analyzer”的使用
1)軟件主界面：點擊分析軟件圖標，進入分析軟件主界面(如下圖)：

2)灰度顯示范圍的調整：在開始對圖片進行分析之前，我們需要通過調整灰度顯示范圍，將背景和條帶亮度調整到最佳。首先，我們將軟件左下角的High值和Low值切換到手動，如下圖所示：

Low值越高，背景越深(建議不要調整)；
High值越小，條帶越亮。

我們一般僅將High值調小，使弱條帶變深。
備注：關于灰度Low值和High值的解釋。
?Low值：顯示灰度的最小值。
如果將Low值調高，可以使弱信號(背景信號)不再顯示，讓圖片背景變得更清楚。反之亦然。
比如：WB原圖的顯示范圍為：20~30,000灰階，弱信號(背景信號)為200，那么將Low值調高到240，則圖像不再顯示240灰階以下的信號，所以背景信號在顯示上會被“過濾”掉，圖像背景變得更加清晰。
?High值：顯示灰度的最大值。
如果將High值調小，圖片中原先最亮的信號則保持最大值灰階值，而弱信號的顯示強度會增加，即弱條帶變深。
比如：WB原圖的顯示范圍為：20~30,000灰階，則最強信號為30,000灰階值，假設弱條帶信號為15,000，當我們將顯示范圍從30,000調低至15,000，那么弱信號條帶和強信號都會輸出最大灰階值，即15,000。此時，我們看到弱信號條帶與強信號條帶的亮度是一樣的。
3)文件菜單欄介紹：

4)圖像菜單欄介紹

a.恢復：裁剪、旋轉、灰度調整后，可一鍵恢復至原始圖像。注意：反色后的圖像不能恢復，但可以點擊縮略圖重新恢復原始圖片。
b.反色：黑白反色功能，即將白色反色為黑色，黑色反色為白色。由于傳統Western Blot膠片的條帶是黑色，所以如果原始圖像的條帶是白色，需要反色為黑色；而核酸膠條帶一般是白色，所以如果原始圖像的條帶是黑色，需要反色為白色。

?原始圖片：

?反色后效果：

c.裁剪：用于圖像的裁剪。
點擊裁剪功能后，菜單欄“裁剪”前會打勾。在快捷欄上的“裁剪”快捷鍵也會同時處于激活狀態。
按住鼠標左鍵，自由框選出所要保留的區域, 如下圖所示。

選中之后按“回車”鍵或在選中區內雙擊鼠標，完成圖像的裁剪，如下圖所示。

d.旋轉：支持各種旋轉模式

e.根據水平線旋轉
當原始圖片的條帶并非處于水平狀態時(如下圖所示)。我們可使用此功能，將條帶放至水平，便于圖像的分析。

點擊選擇此功能后，我們可以用鼠標沿著條帶拉一條水平的直線(如下圖所示)。

調整后的圖片如上圖所示，使條帶基本保持在水平位置，便于后期的泳道和條帶選擇并分析。

f.根據垂直線旋轉
當原始圖片的條帶并非處于水平狀態時(如下所示)。我們也可使用此功能，將條帶放至水平，便于圖像的分析。
點擊選擇此功能后，我們可以用鼠標沿著條帶邊緣拉一條垂直的直線(如下圖所示)。

調整后的圖片如上圖所示，條帶基本保持在水平位置，便于后期的泳道和條帶選擇并分析。

g.模式
如果是CLX原始文件，則有正常、白光、疊加三種模式；如果是導出的JPEG或TIFF等非CLX原始文件，則只有正常模式。
5)工具欄主要功能介紹

a.打開文件
點擊圖標，快速打開實驗圖片。支持包括8bit、16bit、24bit的TIFF、JPG以及BMP文件。
b.顯示圖片尺寸
在顯示快捷欄的右側可通過下拉框調節圖片主窗口圖像顯示的大小，也可選擇“自動”功能自動匹配圖像顯示的尺寸。
將鼠標放到圖片主窗口，即可通過上下滾動鼠標滾軸調節圖片顯示大小。

c.圖片編輯工具

圖像恢復：一鍵恢復原始圖像
圖像反色
圖像裁剪
圖像旋轉
d.泳道自動識別
點擊圖標激活“泳道自動識別”，隨后按住鼠標左鍵框選所需識別的區域。泳道可被自動識別。

e.泳道手動識別

點擊圖標激活“泳道自動識別”功能隨后在“泳道數”中輸入數量，并定義“占空比”
(占空比： 即泳道所占空間的比例。 如果占空比為90%，那么10%為泳道之間的距離，一般占空比設定為90%)。
設定完畢后，按住鼠標左鍵框選所需識別的區域。如設定泳道數為8，那么8條泳道將被框出，并且每個泳道框的大小和距離都是固定的 (如下圖) 。

此時，用鼠標在圖像窗口選擇泳道框，被選中的泳道框顯示為黃色。我們可以通過鼠標拉動被選泳道框的寬度。高度也可以進行調整，但所有高度會同時調整。

f.泳道的添加和清除

泳道的清除：點擊此按鍵， 清除所有泳道和條帶
泳道手動添加和刪除
當我們在識別泳道后，如果需要添加泳道，我們可以點擊手動添加泳道。如下圖所示，我們需要添加一條泳道。

點擊按鈕后，可以在紅色區域內手動添加泳道，結果如下圖所示，根據泳道范圍，按住鼠標左鍵從左至右拖動鼠標，拖動過程中會出現藍色實線，即可添加4號泳道右邊的泳道，也可連續添加。添加結束后，單擊按鈕，退出添加程序，即可進行泳道的調整。

點擊按鈕后，可以在紅色區域內手動刪除泳道，請單擊或連續單擊所需刪除的泳道內的區域。結果如下圖所示，刪除上圖的6號和7號泳道。

g.條帶的識別、添加和刪除

識別所有條帶：即自動識別已被識別泳道內的所有條帶。如下圖所示，紅色被選區域內最后兩個泳道未被識別，所以此泳道上的條帶不會被識別。

檢測當前泳道條帶： 僅自動檢測被選泳道的條帶。如下圖所示：紅色被選區域內，僅一個泳道被選中(黃色)，因此僅此泳道上的條帶被識別。

添加條帶：即手動添加條帶功能。
點擊后，首先選擇主界面中條帶所在的泳道，所選泳道用黃色框顯示，同時被選泳道的圖像會顯示在最右側的條帶窗口。如下圖所示：

在右側條帶窗口根據條帶大小的“厚度”用鼠標左鍵上下拖動，此時出現藍實線顯示條帶范圍，松開左鍵后即確定條帶，藍實線變成白虛線，如果泳道內有多條條帶，可連續添加條帶。被添加的條帶將會在主窗口上被同步添加，用紅實線表示，如下圖“條帶號1”所示：

再次點擊，取消添加條帶后，可在右側調整白虛線的范圍，進行微調。
刪除條帶： 即手動刪除條帶功能。其操作方法與添加條帶相同，首先需選中左側泳道，然后在右側條帶窗口用鼠標左鍵單擊所需刪除的條帶。
h.清除背景
選擇泳道或識別條帶后，可通過消除背景功能，在數據分析中去除背景。
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