正常人血清中IL-6的含量很低，而當患有某些疾病，如類風濕性關節炎、燒傷、腎臟移植排斥反應、敗血癥休克、肝炎、全身性紅斑狼瘡、以及某些腫瘤疾病時，體液中的IL-6水平有不同程度升高，在很多情況下與病程和病情相平行，特別是在愛滋病等疾病中，檢測血液和體液中IL-6的水平可以對疾病的診斷、病情、預后及療效進行評估。本法可用于檢測正常人血清、體液、以及某些細胞培養上清中IL-6水平。

原理

用兔抗IL-6的多克隆抗體包被成固相酶標板，以識別結合待測標本中的IL-6，用豚鼠抗IL-6的多克隆抗體標記生物素（Bio-Ab），用親和素標記辣根酶(HRP-A)，向固相酶標板中加入標準品或待測品，反應、洗滌后，加入Bio-Ab，反應、洗滌后，加入HRP-A反應、洗滌后，酶標板上形成Ab-Ag-Ab-Bio-A-HRP復合物，加酶底物顯色，用酶標儀在相應波長下測定光密度（OD值），根據標準曲線，計算出待測標本中的IL-6含量。

試劑盒組成

1.?????? 真空包裝96孔固相酶標板一塊。

2.?????? 凍干的標準品6瓶：分別用實驗稀釋液1mL溶解，濃度為0、0.05、0.2、0.8、1.6、3.2ng/mL。

3.?????? 生物素化抗體（Bio-Ab）1瓶：10mL。

4.?????? 酶稀釋液 1 瓶：10mL。

5.?????? 酶結合物1管：20μl，用前每μl加酶稀釋液1mL稀釋為工作液。

6.?????? 顯色液：A為凍干品：2瓶，B為液體：2瓶。 臨用前1瓶A加1瓶B溶解。

7.?????? 終止液1瓶：5mL。

8.?????? 洗滌液1瓶：用前用蒸餾水20倍稀釋。

9.?????? 實驗緩沖液 1瓶：10 mL。

注意事項

1 操作??? ⑴為保證實驗結果的準確性，標準品必須做雙孔；條件允許的情況下標準、質控、樣品均應做雙孔。 ⑵為防止樣品蒸發，試驗時應將反應板鋪于有濕布的密閉盒內。⑶血清、枸櫞酸鹽或EDTA抗凝血漿均可檢測，但血清或血漿中殘存凝塊或紅細胞須經離心去除。檢測細胞培養上清時應同時檢測培養液中IL-6含量，作為對照。⑷標本在2-8℃可貯存3天，超過3天應放入-20℃，避免反復凍融。 ⑸分別用加樣器頭吸取每份標本，避免相互交叉。⑹因底物易于氧化且對光敏感，因此一定要用前配置，用后的底物液必須棄去，不可再用。⑺顯色時室溫應在20-25℃，如果溫度較低則應適當延長顯色時間。

2 試劑盒儲存條件??? ⑴除酶結合物存于-20℃外其余試劑均儲存于4℃。⑵酶標板在真空條件下可存放6個月，打開后如果不能一次用完，請裝于密封性好的袋子內，于4℃干燥處保存，并在一個星期內使用。⑶標準品溶解后于4℃保存可使用一個月。⑷Bio-Ab、HRP-A每次吸取時應盡量避免污染，4℃保存可使用6個月，若液體出現渾濁則活性不可再用。

樣品準備

取靜脈血分離血清，待測；如不立即測量，可將樣本密封后，置于2~8℃或-20℃儲存備測，2~8℃保存不應超過48小時，-20℃保存不超過2個月。

操作步驟

1. ELISA測定IL-6操作步驟見下表：? 加樣量（μl）

操作完后用酶聯儀在490nm波長測量各孔OD值。

2 計算??? 用酶標儀上的ELISA自動分析軟件對所測OD值進行處理，選雙對數法繪制曲線，直接得出樣品濃度。⑵以標準物濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（對數坐標），在對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應濃度。

本試劑盒的技術參數

1 靈敏度：本測定法靈敏度為0.05 ng/mL。

2 精密度：用本法同時及不同時間檢測，每組做8個平行樣，批內變異系數5.6%，批間變異系數為10.6%。

3 準確度：⑴用回收實驗驗證方法的準確性，低、高樣品回收率分別為105%、98%。 ⑵將IL-6含量較高的血清樣品做倍比稀釋測定各點的IL-6含量，結果表明測定值與稀釋度之間有良好的線性關系r=0.96。

正常參考值

正常獻血員血清樣品44份測得正常參考值： 0.042±0.016 ng/mL。

建議各實驗室應根據條件建立自己的正常對照組。

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