DH10BAC感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿DH10BAC菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，主要用于生產重組桿狀病毒分子（Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統），可用于藍白斑篩選。

基因型：F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆ (ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG /pMON14272 / pMON7124

特點：1. DH10BAC菌株中含有父本桿粒 bMON14272 、 輔助質粒 pMON7124 ： 父本桿粒 bMON14272包含 mini-F 復制子, 卡那抗性基因, attTn7 位點和 lacZα互補因子；輔助質粒 pMON7124 含有 tnsABCD 區，具有四環素抗性，在細胞擴增過程中丟失，但可提高供體質粒 pFastBac 轉化后的基因轉座效率。2. mcrA、mcrBC 及 mrr 突變使 DH10Bac 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA。3. recA1 和 endA1 的突變有利于插入 DNA 的穩定和高純度質粒 DNA 的提取。4.φ80dlacZ∆M15 的存在使 DH10BAC 可用于藍白斑篩選。具卡那霉素和四環素抗性，pUC19質粒檢測，轉化效率可達108 cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，加入適量目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），并用手撥打 EP 管底輕輕混勻，冰浴30min。

3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。

4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。

5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．感受態細胞最好在冰上融化。

2．混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3．轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

4．涂板時務必涂干，平板表面不留任何水漬。

*本試劑僅供實驗室研究使用