E.coli BL21(DE3)Condon Plus感受態細胞

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1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌E.coli BL21(DE3) Condon Plus感受態細胞菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。補充4種稀有密碼子(AGA、AUA、CCC、CUA)；提高富含AT-或?GC-的真核基因在原核系統中的表達水平。

基因型：F–ompThsdS(rB–mB–)dcm+Tetrgalλ(DE3)endAHte[argUproLCamr][argUileYleuWStrep/Specr]

特點：1．來源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，從而減少對重組蛋白的降解，補充大腸桿菌缺乏的4種稀有密碼子(AGA、AUA、CCC、CUA)對應的tRNA（argU、ileY、proL、leuW），提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-的真核基因在原核系統中的表達水平。2．該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區（DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶），可同時表達T7RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。3．具四環素，氯霉素，鏈霉素，壯觀霉素抗性。pUC19質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。
3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。
4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，?150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。
5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，?37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．剛化凍的細胞轉化效率最高，避免反復化凍。

2．整個動作要輕柔。

3．質粒質量和濃度等的差異會使轉化效率有所下降。

*本試劑僅供實驗室研究使用