慢病毒包裝試劑盒41102ES
產品名稱： 慢病毒包裝試劑盒41102ES
英文名稱： Lentiviral Packaging Kit
產品編號： 41102ES
產品價格： 詢價
產品產地： Yeasen
品牌商標： Yeasen
更新時間： 2025-07-11T09:19:25
使用范圍： null
- 聯系人 : 李自轉
- 地址 : 上海市浦東新區天雄路166弄一號樓三層南單元
- 郵編 : 200030
- 所在區域 : 上海
- 電話 : 139****5640 點擊查看
- 傳真 : 點擊查看
- 郵箱 : lizizhuan@yeasen.com
- 二維碼 : 點擊查看
翌圣慢病毒包裝試劑盒（Lentiviral Packaging Kit）由優化的慢病毒包裝輔助質?；旌衔铮↙entiviral Mix）、表達eGFP蛋白的對照質粒和高效轉染試劑（HG TransgeneTM Reagent）組成，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質粒，且具有慢病毒包裝時間周期短（一周之內即可拿到純化好的高滴度慢病毒）、病毒滴度高的優勢，可應用于針對不同基因和藥物靶標的臨床前細胞學實驗和整體動物實驗。非常適合于病毒包裝初試者。
產品組分
| 類別 | 組分編號 | 組分名稱 | 儲存 | 產品編號/規格 | ||
| 41102ES10（10T） | 41102ES20（20T） | 41102ES40（40T） | ||||
| Part Ⅰ | 41102-A | Lentiviral Mix(1 μg/μL) | -25~-15℃ | 100 μL | 200 μL | 400 μL |
| 41102-C | eGFP 對照質粒（Amp+） | -25~-15℃ | 1.5 μg | 1.5 μg | 1.5 μg | |
| Part Ⅱ | 41102-B | HG TransgeneTM Reagent | 2~8℃ | 0.6 mL | 1.2 mL | 2×1.2 mL |
慢病毒包裝所需其他材料（選用）
1）DMEM：Hyclone
2）FBS,GOLD：MP
3）Penicillin-Stretomycin：YEASEN
4）HEK 293T/293FT：慢病毒包裝及低度檢測所用工具細胞（HEK293T cat.NO.CEH001）
5）Antibiotics：用于穩定轉染細胞株篩選，如Puromycin，G418等
6）Competent cells：GMco（Cat：CCE01）
病毒包裝前的準備
慢病毒表達載體：包含病毒包裝，侵染和將病毒重組基因整合到基因組DNA中以便表達目的基因或者shRNA的基本元件。
DNA溶液的制備：以QIAGEN公司的質粒抽提試劑盒提取慢病毒包裝系統中各種質粒DNA，質粒DNA溶于無菌的TE或ddH2O中，以紫外光吸收法測定其濃度及純度，保證所提質粒DNA 的A260/A280在1.8～2.0之間。
細胞狀態：良好的細胞狀態對病毒的包裝至關重要，避免細胞培養基有細菌、真菌或支原體的污染，盡量使用傳代次數較少的細胞，如果細胞是剛復蘇的話，最好傳兩代之后再包裝。
慢病毒包裝
翌圣生物慢病毒載體表達系統由pGMLV慢病毒載體和Lentiviral Mix質粒組成。pGMLV慢載體中含有HIV的基本元件5’LTR和3’LTR以及其他輔助元件，例如WPRE和cPPT/CTS等。翌圣可以根據不同的實驗目的針對pGMLV載體改造以進行啟動
子活性研究、基因表達研究、RNA干擾等研究。Lentiviral Mix能夠表達病毒包裝需要的各種必需成分如：gag基因，編碼病毒主要的結構蛋白；pol基因，編碼病毒特異性的酶；rev基因，編碼調節gag和pol基因表達的調節因子；還含有單純皰疹病毒來源的VSV-G基因，提供病毒包裝所需要的包膜蛋白，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質粒。
使用流程
制備編碼慢病毒顆粒的重組病毒質粒及其輔助包裝原件載體質粒，重組質粒載體和輔助質粒載體分別進行高純度無內毒素抽提，使用HG TransgeneTM Reagent進行共轉染293T細胞，轉染后18 h 更換為完全培養基，培養48 h后，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在293T細胞中測定病毒滴度。在一定滴度范圍內的慢病毒顆?？梢詽M足大部分體內體外實驗需求。
1）293T細胞分盤：轉染前一天，將已經長好的細胞以合適比例傳代到10 cm培養皿中，當細胞長到~80%時準備轉染。
2）轉染前換液：轉染前1~2 h 將需要轉染的細胞換新鮮的培養基，12 mL/10 cm皿。注意：293T細胞貼壁性不是很好，換液時應小心滴加盡量避免沖起細胞。
3）轉染：取無菌的1.5 mL EP管或15 mL離心管，按下列組分配制反應體系：
| 無血清DMEM | 1 mL |
| DNA | 10 μg |
| Lentiviral Mix | 10 μL(10 μg) |
| HG TransgeneTM Reagent | 60 μL |
混勻后，室溫放置18 min~20 min后，均勻滴加到提前換過液的培養皿中，后置于CO2培養箱中培養。
4）換液：轉染18~20 h后，小心吸掉細胞培養液棄于盛有消毒液的廢液杯中（注意：此時培養基中已含有少量的病毒，必須經處理后才能丟棄，所用的移液槍頭等必須經消毒液浸泡處理后才能丟棄），然后加15 mL新鮮的培養基（也可根據實驗要求換為無血清的DMEM）繼續培養。
5）病毒收集：換液48 h后，吸取細胞上清液于50 mL離心管，4℃，500 g離心5 min，上清液用0.45 μm濾器過濾后轉移到新的離心管中。此時上清液中的病毒顆粒可以直接去檢測滴度或者感染目的細胞，如果對病毒的滴度及純度有較高要求，可對上清液進行濃縮與純化。
6）病毒分裝與保存：將病毒以40~50 μL分裝，后保存于-80℃。
冰袋運輸。HG TransgeneTM Reagent（41102-B）2~8 ℃保存，其余組分（41102-A、41102-C）均于-25~-15℃保存，有效期1年半。
Q:慢病毒包裝試劑盒中是否含有 pGMLV 慢病毒載體？穩轉怎么篩選？還需要再額外購買其他質粒嗎？
A: 含有該載體；穩轉篩選所用為Puromycin，G418；后期分選為熒光篩選；只需要客戶另外準備目的質粒。
Q: 慢病毒包裝試劑盒中 pGMLV 慢病毒載體，有質粒（陽性對照）序列嗎？
A: 慢病毒包裝，一般用三質?；蛘咚馁|粒系統，分別構建病毒的不同組件，我們的慢病毒包裝試劑盒，提供陽性對照的質粒，但是：（1）質粒序列都不提供；（2）質粒的酶切位點不能提供。
Q: 為什么容易個試劑盒包裝的病毒感染成功了，有的卻感染不成功？
A: ①質粒構建有問題，如果不是同一個質粒，可以質粒測序確定質粒是否正確，是否有移碼或者脫靶問題；
②如果質粒沒問題，可能是慢病毒載體不正確導致病毒包裝不成功，我們試劑盒是兼容二代，三代的慢病毒載體；
③如果以上兩種都沒問題，可能是感染的細胞是懸浮細胞或者是貼壁不牢的細胞，可以使用聚凝胺增加病毒感染率或者是使用腺病毒包裝。
Q: 轉染試劑放-20了，還可以再用嗎？
A: 不建議用了，轉染試劑是脂質體的，不能冰凍。
Q: 慢病毒包裝試劑盒中陽性對照：eGFP 對照質粒（Amp+）的推薦引物序列是什么？
A: GFP-qF:TGTTCACCGAGTACCCCCAG
GFP-qR:CGCCGTAGAACTTGGACTCG。
[1] Bai D, Du J, Bu X, et al. ALDOA maintains NLRP3 inflammasome activation by controlling AMPK activation. Autophagy. 2022;18(7):1673-1693. doi:10.1080/15548627.2021.1997051(IF:16.016)
[2] Hu P, Li H, Sun W, et al. Cholesterol-associated lysosomal disorder triggers cell death of hematological malignancy: Dynamic analysis on cytotoxic effects of LW-218. Acta Pharm Sin B. 2021;11(10):3178-3192. doi:10.1016/j.apsb.2021.02.004(IF:11.614)
[3] Xu C, Wu J, Wu Y, et al. TNF-α-dependent neuronal necroptosis regulated in Alzheimer's disease by coordination of RIPK1-p62 complex with autophagic UVRAG. Theranostics. 2021;11(19):9452-9469. Published 2021 Sep 13. doi:10.7150/thno.62376(IF:11.556)
[4] Hu P, Wang J, Qing Y, et al. FV-429 induces autophagy blockage and lysosome-dependent cell death of T-cell malignancies via lysosomal dysregulation. Cell Death Dis. 2021;12(1):80. Published 2021 Jan 13. doi:10.1038/s41419-021-03394-4(IF:8.469)
[5] Qing Y, Li H, Zhao Y, et al. One-Two Punch Therapy for the Treatment of T-Cell Malignancies Involving p53-Dependent Cellular Senescence. Oxid Med Cell Longev. 2021;2021:5529518. Published 2021 Sep 21. doi:10.1155/2021/5529518(IF:6.543)
[6] Cao B, Deng H, Cui H, et al. Knockdown of PGM1 enhances anticancer effects of orlistat in gastric cancer under glucose deprivation. Cancer Cell Int. 2021;21(1):481. Published 2021 Sep 10. doi:10.1186/s12935-021-02193-3(IF:5.722)
[7] Qing Y, Wang X, Wang H, et al. Pharmacologic targeting of the P-TEFb complex as a therapeutic strategy for chronic myeloid leukemia. Cell Commun Signal. 2021;19(1):83. Published 2021 Aug 9. doi:10.1186/s12964-021-00764-5(IF:5.712)
[8] Gao Z, Zhong M, Ye Z, et al. PAK3 promotes the metastasis of hepatocellular carcinoma by regulating EMT process. J Cancer. 2022;13(1):153-161. Published 2022 Jan 1. doi:10.7150/jca.61918(IF:4.207)