Annexin V-Alexa Fluor 488/PI凋亡檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品名稱： Annexin V-Alexa Fluor 488/PI凋亡檢測(cè)試劑盒
英文名稱： Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品編號(hào)： C331404
產(chǎn)品價(jià)格： 518
產(chǎn)品產(chǎn)地： 美國(guó)
品牌商標(biāo)： Arcegen
更新時(shí)間： 2025-10-20T09:25:48
使用范圍： null
| 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| 20T | 518.0 |
| 50T | 1120.0 |
| 100T | 1960.0 |
- 聯(lián)系人 : 孟醒
- 地址 : 申江南路4388號(hào)1幢2層208室
- 郵編 : 201314
- 所在區(qū)域 : 上海
- 電話 : 189****7703 點(diǎn)擊查看
- 傳真 : 點(diǎn)擊查看
- 郵箱 : cmeng@magibagbio.com
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI凋亡檢測(cè)試劑盒利用帶有Alexa Fluor 488標(biāo)記的Annexin V作為探針，來(lái)檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生，可通過(guò)流式細(xì)胞儀或其他熒光檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。
試劑盒檢測(cè)原理如下：在正常活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)；在早期凋亡的細(xì)胞中，PS從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合。因此，它能夠通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一種核酸染料，它不能透過(guò)正常細(xì)胞或早期凋亡細(xì)胞的完整的細(xì)胞膜，但可以透過(guò)凋亡晚期和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此，將Annexin V與PI聯(lián)合使用時(shí)，PI則被排除在活細(xì)胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡細(xì)胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞同時(shí)被Alexa Fluor 488和PI結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽(yáng)性（Annexin V+/PI+）。
產(chǎn)品規(guī)格
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貨號(hào) |
C331404E/C331404S/C331404M |
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規(guī)格 |
20 T/50 T/100 T |
組分信息
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
C331404E |
C331404S |
C331404M |
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C331404-A |
Annexin V-Alexa Fluor 488 |
100 μL |
250 μL |
500 μL |
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C331404-B |
PI Staining Solution (20 μg/mL) |
200 µL |
500 µL |
1 mL |
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C331404-C |
1×Binding Buffer |
10 mL |
25 mL |
50 mL |
儲(chǔ)存條件
冰袋（wet ice）運(yùn)輸。-20℃避光長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融，一年有效。如果需要在短時(shí)間內(nèi)多次重復(fù)使用，可以在4℃避光保存，半年有效。
注意事項(xiàng)
1、由于細(xì)胞凋亡是一個(gè)快速的過(guò)程，建議樣品在染色后1小時(shí)之內(nèi)進(jìn)行分析。
2、對(duì)于貼壁細(xì)胞，消化是一個(gè)關(guān)鍵步驟。貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時(shí)如有漂浮細(xì)胞，需收集漂浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞后合并染色。處理貼壁細(xì)胞時(shí)要小心操作，盡量避免人為損傷細(xì)胞。胰酶消化時(shí)間過(guò)短，細(xì)胞需要用力吹打才能脫落，容易造成細(xì)胞膜的損傷，PI攝入過(guò)多；消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，細(xì)胞膜同樣易造成損傷，甚至?xí)绊懠?xì)胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-Alexa Fluor 488的結(jié)合。消化時(shí)將胰酶鋪滿孔板底后，輕搖時(shí)胰酶與細(xì)胞充分接觸，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段時(shí)間，待細(xì)胞間空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA，EDTA會(huì)影響Annexin V與PS的結(jié)合。
3、如果樣品來(lái)源于血液，請(qǐng)務(wù)必除去血液中的血小板。因?yàn)檠“搴蠵S，能與Annexin V結(jié)合，從而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。可以使用含有EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。
4、試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
5、Annexin V-Alexa Fluor 488和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。
6、本產(chǎn)品僅用于科研。
使用說(shuō)明
1、樣品染色
1）懸浮細(xì)胞：300 g，4℃離心5 min收集細(xì)胞。貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300 g，4℃離心5 min收集細(xì)胞。胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，以防引起假陽(yáng)性。
2）用4℃預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞2次，每次均需300g，4℃離心5 min。
3）吸棄PBS，加入100 μL 1×Binding Buffer重懸細(xì)胞。
4）加入5 μL Annexin V-Alexa Fluor 488和10 μL PI，輕輕混勻。
5）避光、室溫反應(yīng)15 min。
6）加入400 μL 1×Binding Buffer，混勻，樣品在1小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
【注意】為了避免洗滌細(xì)胞時(shí)損失細(xì)胞，在吸液時(shí)可以用大的Tip頭套上小的Tip頭吸液。
2、流式細(xì)胞儀分析
Alexa Fluor 488最大激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為519 nm；PI-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)波長(zhǎng)為535 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為615 nm。用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），Alexa Fluor 488為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。每個(gè)樣采集10,000 events。
3、熒光顯微鏡分析
1）滴一滴用Annexin V-Alexa Fluor 488/PI雙染的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞。
2）在熒光顯微鏡下用雙色濾光片觀察。Annexin V-Alexa Fluor 488熒光信號(hào)呈綠色，PI熒光信號(hào)呈紅色。