Bradford法蛋白濃度測定試劑盒

英文名稱 Bradford Protein Assay Kit

儲存條件 開封使用后請密封保存，本試劑盒自訂購之日起九個月內有效。

單位 盒

bradford蛋白定量試劑盒產品內容：

組成	包裝（2500微孔)	保存
5×G250染色液	100ml	2-8℃
PBS稀釋液	30ml	2-8℃
蛋白標準(5mg/ml BSA)	1ml	-20℃

產品簡介：

考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質結合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm變為595nm，在一定的濃度范圍內，測定的吸光度值A595與蛋白質濃度成正比。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響，樣品中巰基乙醇的濃度可高達1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達5mM，但受略高濃度的去垢劑影響，需確保SDS的濃度。

操作說明：

一．微孔酶標儀法?

1.?完全溶解蛋白標準品，取10ul，稀釋至250ul?，使終濃度為0.2mg/ml。待測蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。?

2.?5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻，取1ml 5×G250染色液，加入4ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。?

3.?將標準品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分別加到96孔板中，加PBS稀釋液補足到20微升。

4.?將樣品作適當稀釋（最好多做幾個梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋），加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差，標準線前面的點可能不很準確，所以盡可能的讓樣品點落在標準線1/2后。

5.?各孔加入200微升稀釋后的1×G250染色液，室溫放置3-5分鐘。?

6.?用酶標儀測定A595，或560-610nm之間的其它波長的吸光度。?

7.?根據標準曲線計算出樣品中的蛋白濃度。?

二．分光光度計法?

三．如無酶標儀，染色反應可在離心管中進行，反應液混勻后加入比色皿中，使用分光光度計測定吸光值。

步驟如下：???

1.?取八支（或者更多）干凈的10ml離心管，標記上號。?

2. 取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀釋至終濃度為0.2mg/ml。?

3. 5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻，取10ml 5×G250染色液，加入40ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

4. 按下表加入試劑(以每孔5ml計，多余的用來清洗比色皿)

離心管號	1	2	3	4	5	6	7（樣品管1）	8（樣品管2）	9（樣品管3）
標準蛋白BSA	0ul	100ul	200ul	300ul	400ul	500ul	500ul適當稀釋的樣品1	500ul適當稀釋的樣品2	……
PBS	500ul	400ul	300ul	200ul	100ul	0ul	0ul	0ul	0ul
1XG250染色液	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml

5. 反應3分鐘后測OD值。為了實驗的準確性，可每間隔2分鐘加一管染色液，每間隔2分鐘測一管OD值。如下表：

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參考文獻：

《Cetuximab and Doxorubicin loaded dextran-coated Fe3O4 magnetic nanoparticles as novel targeted nanocarriers for non-small cell lung cancer》 作者:Qinlu Zhang，Qian Liu，Menghan Du，Yali Cui，Lixia Zhang，Lili Guo，Le Ma，Mingwei Chen， 期刊:Journal of Magnetism and Magnetic Materials 影響因子:3.046 PMID:

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《The critical roles of exposed surface residues for the thermostability and halotolerance of a novel GH11 xylanase from the metagenomic library of a saline-alkaline soil》 作者:Zhongyuan，Li，Xiumei Li，Tianhui Liu，Shiheng Chen，Huihui Liu，Hui Wang，Kun Li，Yajian Song，Xuegang Luo，Junqi Zhao，Tongcun Zhang 期刊:International Journal of Biological Macromolecules 影響因子:4.784 PMID:30986455

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