冰凍切片(frozen section)是一種在低溫條件下使組織快速冰凍到一定硬度，然后進行切片的方法。冰凍切片30分鐘出結果，可在手術過程中摘取樣本送至病理科快速診斷。

儀器：冰凍包埋儀、冰凍染色機、冰凍切片機

耗材：冰凍頭、冷凍包埋裝置

試劑：冷凍包埋劑（OCT）、蘇木素、伊紅、二甲苯、75%酒精

冰凍切片流程

取材→包埋（<30s）→冷凍（1-3min）→切片（2-5min）→固定（10-15s）→染色（4-5min）→封片（<1min）

取材

新鮮組織取材不能遇水，如果組織自身帶水較多，可用濾紙吸干（目的是為了防止冰晶空洞等現象在切片過程中產生）；取材的器械要保持干燥，取材時所取的范圍應盡量避開出血壞死區域及脂肪區域；

所取組織塊大小應合適。組織過大切片時阻力加大，難免產生刀痕及褶皺，加大了制片的難度。

包埋

包埋機一般使用OTC或普通膠水，OTC包埋劑質感細膩，對刀片損傷小，有利于切片；

包埋時將包埋劑涂抹均勻，并根據組織情況和醫生的要求確定包埋方向，如管腔、皮膚、囊壁等要立埋；包埋體積較小的組織，可以先擠壓少許的包埋劑形成一個平臺，再放入小組織進行包埋。

冰凍溫度與時間：

冰凍的溫度與時間時制作冰凍切片的關鍵因素，需要根據組織的種類、厚度和大小來調節；

冰凍溫度過低，會造成組織過硬，切片碎裂；溫度過高會造成組織硬度不夠，難以切片。

切片

在組織和包埋劑冷凍到發白后即可開始切片；

切片時右手搖輪轉要力道均勻、柔和、緩慢，切片厚度掌握在5微米，左手持毛筆在切片形成時按住組織邊緣，使其不發生卷曲

將切片展平粘貼在干凈的載玻片上，應立即放入固定液中固定，如果固定不及時，會發生細胞退變，切片中細胞核模糊不清呈霧狀。

冰凍切片HE染色流程

固定（95%乙醇）→蘇木素→水洗→鹽酸乙醇分化（0.5~1%）→水洗→溫水返藍→伊紅→梯度酒精→二甲苯透明→封片

 注意事項

1、組織取材要規范：

冰凍切片的組織要盡可能新鮮，不觸碰誰，取材要及時，動作要迅速。

2、取材大小要厚薄適中

在確保渠道主要病變的前提下，盡量避開鈣化、壞死、脂肪等。

3、貼片

可在載玻片上滴3μl左右的PBS后貼片, 以所滴的PBS為起點輕輕沾起組織片, 該過程要防止氣泡產生。