ER2566感受態細胞

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1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌ER2566感受態細胞菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。是NEB公司開發的具有超高轉化效率的蛋白表達原核菌株，能夠有效抑制表達的異源蛋白在大腸桿菌體內的降解。

基因型：F-λ-fhuA2[lon]ompTlacZ::T7genegalsulA11Δ(mcrC-mrr)114::IS10R(mcr-73::miniTn10-TetS)2R(zgb-210::Tn10)

(TetS)endA1[dcm]

特點：1．Lac啟動子啟動下游T7RNA聚合酶的表達，可用于T7啟動子表達載體(如pET系列)的高水平蛋白表達。2．fhuA2賦予ER2566菌株對噬菌體T1的抗性。3．lon和ompT蛋白酶缺陷菌株，能夠有效防止表達的異源目的蛋白在細菌體內的降解。4．Δ(mcrC-mrr)114，mcr-73突變的存在使ER2566菌株無法對外源DNA進行標記、限制，提高了外源甲基化DNA的轉化效率。pUC19質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。

3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。

4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。

5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．剛化凍的細胞轉化效率最高，避免反復化凍。

2．質粒質量和濃度等的差異會使轉化效率有所下降。

*本試劑僅供實驗室研究使用