產品簡介

Exosome（外泌體）是由活細胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質雙分子層結構；存在于細胞培養上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中；Exosome攜帶有多種蛋白質、脂類、DNA和RNA等重要信息，不僅在細胞與細胞間的物質和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標志物。

本試劑盒采用獨特的分離技術，可以快速從體液如腦脊液、羊水、唾液、肺泡灌洗液及鼻腔盥洗液等體液中獲得大量完整的外泌體顆粒，適用于下游的細胞共培養、電鏡分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測序等應用。

組分信息

儲存條件

室溫運輸，本試劑盒可于室溫穩定保存24個月。

使用說明

1.樣品制備：

1）收集新鮮的樣品，置于冰上待用；若為凍存的樣品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解凍，待完全融化后置于冰上待用。

2）取1 mL（單次樣品量不能低于1 mL）體液樣品轉移至離心管中，4℃，3000×g離心10 min，棄沉淀，并將上清轉移至新的離心管中。

3）將轉移的上清，4 ℃，12,000×g離心10 min，棄沉淀，將上清液轉移至新的離心管中。

2.外泌體分離：

1）向預處理后的樣品中，按照下表加入Exosome isolation solution （其他樣品量根據表中試劑用量進行等比例變換）。

2）蓋緊離心管蓋，渦旋振蕩1 min，再放置于2℃至8℃靜置8 h以上（注：增加靜置時間可提高外泌體得率，但不可超過24 h）。

3）取出裝有混合液的離心管，4℃，12,000×g離心30 min，棄上清（盡可能吸凈上清液），收集富含外泌體的沉淀。

4）將含有沉淀的離心管再次于4℃，12,000×g離心2 min，棄上清（盡可能吸盡上清液）。

5）吸取一定量體積的1×PBS溶液均勻吹打離心沉淀物，待其充分懸浮于PBS后，將懸液轉移至新的1.5 mL離心管中。

【注】加入PBS的量，建議根據初始樣本的體積決定，初始樣本體積：1×PBS體積=10:1。

6）將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃，12,000×g離心2 min，棄沉淀，保留上清液，該上清液即富含外泌體顆粒的溶液。

【注】此時如果依然可以看到明顯的沉淀，建議重復步驟6，重新進行洗滌和沉淀。

7）純化后的外泌體可于4℃保存3天，-80℃長期保存，建議對外泌體進行分裝后保存，避免反復凍融。

外泌體濃縮（可選）：

鑒于體液中雜蛋白較多，如果后續需要進行細胞共培養或者高通量測序，建議進一步純化外泌體?？梢允褂妹芾聿?00kD的孔徑的超濾管于4℃以14,000×g離心10-30 min，內管中即為純化后的外泌體顆粒；除此之外，還可以使用抗體包被的磁珠進行親和純化。

外泌體除菌（可選）：

獲得的外泌體后期需要與細胞共培養，可以使用0.22 μm的濾器進行過濾除菌。初次嘗試時，建議外泌體蛋白濃度在10-100 μg/mL內做梯度摸索，選擇一個較為合適的條件。

注意事項

1、使用前請將外泌體抽提試劑（41204-A）充分混勻。

2、產品只針對體液樣本，不適用其它血清/血液或者是細胞培養上清中外泌體的抽提；如果需要進行細胞上清外泌體分離，請選用細胞培養上清外泌體快速抽提試劑盒。

3、如果想要進一步純化外泌體，可以使用相應抗體包被的磁珠進行親和純化。

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5、本產品僅作科研用途！

Ver.CN20230920