DNase I (1 U/μL) 產品說明書

產品概述

DNase I(脫氧核糖核酸酶 I)，即Deoxyribonuclease I，是一種可消化單鏈或雙鏈DNA的脫氧核糖核酸內切酶，它識別并切割磷酸二酯鍵，產生5'端為磷酸基團，3'端為羥基的單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸。DNase I的活性依賴于Ca²⁺，并可被二價金屬離子Mg²⁺、Mn²⁺等激活。在Mg²⁺存在的情況下，該酶可隨機識別并切割雙鏈DNA任意一條鏈上的任意位點；而在Mn²⁺存在的情況下，可識別并切割DNA兩條鏈上幾乎相同的位點，產生平末端或有1-2個核苷酸突出的粘末端DNA片段。

產品用途

1.適用于RNA提取、體外轉錄、RT-PCR實驗中DNA的去除。

2.用于足跡法（Footprinting）分析DNA-蛋白質相互作用。

3.與DNA Polymerase I一起用于切口平移（nick translatioin）。

4.DNA隨機片段文庫構建。

5.細胞凋亡TUNEL檢測中部分剪切基因組DNA作為陽性對照。

單位定義

37℃ 10 min，將能夠完全降解1 μg pUC19質粒DNA所需的酶量定義為1個活性單位(U)。

來源

大腸桿菌重組表達。

保存條件

 -30 ~ -15℃保存。

反應條件

37℃孵育15-30 min。

失活或抑制

加入終濃度為5 mM的EDTA并經過65℃加熱10 min。

使用實例

體外轉錄后去除DNA模板，具體操作如下：

1. 體外轉錄產物中加入DNase I，每1 ug DNA模板需加入2-4 U DNaseI消化去除。

2. 37℃孵育15 min。

3. 加入終濃度為5 mM的EDTA，65℃加熱10 min終止反應。

注意事項

1. 最適pH：7.0-8.0。

2. 活化劑：DNase I需要二價陽離子以達到最大活性。

3. 抑制劑：EDTA, EGTA, SDS。

4. 特異性：降解DNA的雙鏈特異性的核酸內切酶。

5. 使用時將酶置于冰上操作，使用完畢后-20℃保存。