HyCyte™間充質干細胞成軟骨誘導分化培養基
產品名稱： HyCyte™間充質干細胞成軟骨誘導分化培養基
英文名稱： Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Chondrogenic Differentiation Kit
產品編號： BMHX-D203
產品價格： 0
產品產地： 蘇州
品牌商標： HyCyte™
更新時間： null
使用范圍： null
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|??舉例說明：成軟骨誘導步驟（三維誘導）
（以下步驟僅供參考，詳情參見參見說明書）
1. 間充質干細胞的準備:
將對數生長期的細胞消化下來計數，取3×105個細胞轉移到15mL離心管中，250g離心4min。
棄上清，加入0.5mL成軟骨誘導分化培養基基礎液，重懸細胞，150g離心5min。小心棄去上清，加入0.5mL成軟骨誘導分化培養基誘導液，重懸細胞，150g離心5min。
將15mL離心管的管蓋稍稍旋開，放置于37℃，5% CO2培養環境下培養。
2. 細胞分化誘導:
24h后觀察細胞沉淀形變團聚的情況，如有明顯的變化，則小心輕柔地撥動管底，嘗試讓細胞團脫離管底，全部浸潤在誘導液中。
置于37℃，5%CO2培養環境下培養約21天，通常每2天更換一次新鮮配制的成軟骨誘導分化培養基誘導液。注意觀察細胞團成球情況及表面光滑度，決定終止細胞誘導的時間，并進行染色鑒定。
3. 染色鑒定
a)軟骨球固定：將軟骨球從離心管中轉移至EP管，并使用1×PBS清洗兩次，最后置于適量的4%中性甲醛溶液中。
b)石蠟包埋切片：軟骨球經石蠟包埋后切片。
c)阿利辛藍染色：將石蠟切片脫蠟，使用阿利辛藍染液染色30min，用自來水流水沖洗2min，蒸餾水沖洗1次。
d)誘導評估：顯微鏡下觀察成軟骨染色效果，并進行圖像采集和誘導評估。誘導成功時，軟骨組織中的內酸性粘多糖可被阿利辛藍染成藍綠色。
NOTE: 間充質干細胞的成軟骨分化水平因細胞類型、細胞供體來源，培養條件、細胞代次、細胞狀態和分化時間等因素而異。
|??舉例說明：成軟骨誘導步驟（平面誘導）
（以下步驟僅供參考，詳情參見參見說明書）
1. 將對數生長期的細胞消化下來計數，成軟骨誘導分化培養基細胞重懸細胞，離心后調整細胞密度密度1-2.0×107cells/mL。
2. 20μL懸滴到24孔板中央。（20μL含有4×105細胞）。
37℃培養3h使細胞貼壁。
3. 補充200uL誘導分化培養基正常培養，每隔2-3天換液一次。按照以上換液頻率誘導21-28天，并注意觀察細胞形態變化。
4. 細胞固定：吸去培養基使用適量1×PBS清洗一次，棄去后取適量4%中性甲醛溶液覆蓋培養器皿底面，室溫固定30-60min，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次。
5. 阿利新藍染色：向清洗干凈的誘導孔內加入適量染色液，避光靜置染色30min。吸去阿利新藍染色液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1×PBS避免細胞干燥。
6. 誘導評估：顯微鏡下觀察成軟骨染色效果，并進行圖像采集和誘導評估。誘導成功時，軟骨組織中的內酸性粘多糖可被阿利辛藍染成藍綠色。
NOTE:間充質干細胞的成軟骨分化水平因細胞類型、細胞供體來源，培養條件、細胞代次、細胞狀態和分化時間等因素而異。
|??成軟骨染色NEW
