乳鼠心肌細胞培養
產品名稱： 乳鼠心肌細胞培養
英文名稱： Western Biotechnology Inc
產品編號：
產品價格： 歡迎來電詳詢023-65316016，023—65316556
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更新時間： 2023-07-31T09:56:51
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?乳鼠心肌細胞培養
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目的
正確使用心肌組織中分離心肌細胞的方法和程序，掌握組織取材、剪切、細胞分離、混勻、計數、接種和器械使用等的操作要領、方法，按照無菌操作技術進行乳鼠心肌細胞培養。
原理
乳鼠心肌細胞屬于原代生長細胞。心肌組織中心肌細胞約占50%，非心肌細胞占50%，用酶消化法將心肌組織碎塊經純化分離成單個心肌細胞，用培養基制成心肌細胞懸液，內心肌細胞可達95%，在體外適宜條件下，使心肌細胞生長繁殖，并保留其一定的結構和功能特性。在乳鼠心肌細胞培養實驗中能直接觀察到培養心肌細胞生命活動的動態過程，還可利用電鏡手段、同位素標記、放免法和免疫組化法來研究細胞形態結構及細胞內化學物質的分布。
主要操作規程
試劑配制
1、D-Hanks 液(g/L)： KCl 0.40，KH2PO4 0.06，NaCl 8.00，NaHCO3 0.35，Na2HPO4·12H2O 0.13，酚紅0.02。以1mol/L HCl 或1mol/L NaOH 調整溶液pH 值至7.0-7.2，每瓶100 mL 分裝，4℃冷藏備用。
2、0.125%胰蛋白酶：0.125 g 胰蛋白酶干粉溶于100mL D-Hanks 液中，攪拌2h，4℃冰箱放置過夜，每瓶8mL 分裝，-20℃冷藏備用。
3、DMEM 培養基：DMEM 干粉(1L 量)溶于500mL 三蒸水中，充分攪拌溶解，將3.0g NaHCO3 溶于少量三蒸水中，混合，定容至1L 后調pH 值至6.8-7.0，每瓶80mL 分裝，4℃冷藏備用。
4、雙抗液配制：100 萬U 硫酸鏈霉素溶于l0mL Hanks 液中，80 萬U 青霉素粉溶于8mL 上述硫酸鏈霉素的Hanks 液中，配成每毫升含青霉素、鏈霉素各10 萬U 的母液。使用時，在100 mL 培養基中加母液0.1 mL，則培養基內青霉素、 鏈霉素終濃度為100 U/mL。
5、胎牛血清：胎牛血清在56℃水浴中滅活30min，青霉素小瓶分裝，-20℃保存備用。將20mL 胎牛血清加入80mL DMEM 中，配成終濃度為含20%胎牛血清的DMEM。
6、PBS 緩沖液：KCl 0.2g，KH2PO4 0.2g，NaCl 8.0g，Na2HPO4·12H2O 2.08g溶于1000mL 三蒸水中。
消毒準備
先檢查顯微鏡、磁力攪拌器及離心機是否好用，提前三小時把小牛血清、胰酶、抗生素取出解凍。其余未凍藥品提前20分鐘取出來與室溫平衡。新潔爾滅（0.1％）紗布（用10 mL 5％的新潔爾滅加水至500 mL）消毒地面（1：500的84液），用酒精棉球擦拭超凈工作臺臺面后把物品擺放好，開紫外線燈照30分鐘后開風機吹至實驗結束。
細胞培養
1、把兩個5 mL注射器分別插入DMEM和胰酶中，分別向兩個圓皿中加入5 mL 的DMEM培養液。用一把大鑷子從鼠盆里取出一只生后2~3天的SD大鼠放入0.1％新潔爾滅浸泡一下后拿出放在泡沫板上，用針頭把鼠固定（位置擺正），用另一把大鑷子取碘酒棉球擦皮膚，再用酒精棉球脫碘，取一把小剪子及小鑷子開皮，充分撕拉開，再用酒精棉球消毒，后換另一把小剪子和鑷子在劍突處正中線稍偏左開胸取心。
2、取出的心放在剛才準備的一個裝有DMEM的圓皿中再取下一只。重復以上過程。（鼠全部殺死后，把取鼠鑷及泡沫板、新潔爾滅缸等拿出臺面。消毒、清潔，鋪紗布、換手套。
3、用第三副剪子和鑷子把圓皿中的心臟周邊的血凝及纖維組織剔除掉，放在另一個預先裝好DMEM的圓皿中。抽取5 mL的胰酶，然后將其中少許放入50 mL的小燒杯中，大部分倒入三角燒瓶中。用第四副剪子將燒杯中的心臟剪成??? 1 mm3的碎塊，倒入三角燒瓶中（可用剪刀刮入），再用剩余胰酶刷凈燒杯。
4、把溫度計和三角燒杯放入250 mL燒瓶中，（事先調好水量，多會沒過三角燒杯，少溫度會不均勻）。打開磁力攪拌器電源，調溫度（使-緩慢加到34~35 ℃） 和轉速（轉速不可過快，否則會打碎細胞，基本上標志為平行，一定要注意監控）。
5、溫度達到34℃時開始計時，第一次為10分鐘，以后可為8分鐘，事情況而定。在此期間，在試管架上擺上5、6個離心管，標上1、1，2、2。其中在1號兩管事先加入DMEM液各2毫升。
6、10分鐘后，把三角燒瓶取下，磁力攪拌器關上，用一個吸管輕輕吹打（使消化下來的細胞徹底從組織團快上掉下來），這個吸管（1）用后固定放在一個離心管中，以后每次消化后取下都用其吹打幾下，第一次上清棄去，然后向兩個1號管分別倒入2 mL上清（盡量不要把組織倒出，也不要剩液太多，以免消化下的細胞重復消化造成損傷），用另一個吸管（2）混勻配平兩個管（即兩個管水平高度相同），輕輕吹打，以免損壞細胞。
7、接著把這兩個離心管放入離心機中，調10分鐘，800或1000轉，打開關。
威斯騰實驗服務流程
威斯騰生物服務項目
| 分子生物學檢測 | 蛋白質與免疫學 | 動物實驗 |
| 實時熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
| ELISA（酶聯免疫吸附法）技術 | Western-blot?實驗服務 | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標檢測 | 蛋白雙向電泳實驗服務 | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報告基因檢測 | 原核蛋白表達純化 | 骨神經損傷模型 |
| 染色質免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達純化 | 心肌缺血模型 |
| GST?pull?Down | ITRAQ定量蛋白質組學 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學 | 肺動脈高血壓動物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝 | 實驗課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
| 過表達/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
| 過表達/干擾腺病毒包裝純化 | 細胞整體實驗外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉錄病毒包裝純化 | 動物整體實驗外包 | 過敏性哮喘模型 |
| 腺相關病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細胞培養 | 肝纖維化模型 |
| 細胞因子芯片 | 骨髓間充質干細胞培養 | 膽結石模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 脂肪干細胞培養 | 急性胰腺炎模型 |
| 生長因子芯片 | 心肌成纖維細胞培養 | 急性腎衰竭模型 |
| 炎癥因子芯片 | 軟骨細胞培養 | 體內血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管內皮細胞培養 | 關節炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神經元細胞培養 | I型和II型糖尿病模型 |
| 趨化因子芯片 | 內皮組細胞原代培養 | 裸鼠成瘤 |
| HuProt?TM?20K人類蛋白組芯片 | 基因編輯動物 | |
| 電生理相關服務 | 動物整體實驗服務 | |
| 膜片鉗實驗 | ||
| 細胞生物學檢測 | 高通量測序 | 代謝組學 |
| 細胞原代培養 | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
| 細胞凋亡檢測 | 全基因組測序 | 核磁共震NMR |
| 細胞周期檢測 | RNA-Seq測序 | |
| 細胞克隆形成實驗 | 外顯子測序 | 影像學相關實驗 |
| Transwell細胞遷移/侵襲 | 16s擴增子測序 | Micro-CT |
| 流式分選 | Small?RNA測序 | 小動物活體成像 |
| CCK8/XTT檢測 | 宏基因組測序 | 核磁共振 |
| 臺盼藍檢測細胞活性 | 單細胞測序 | PET-CT |
| 藥物篩選細胞學實驗 | circleRNA測序 | |
| 細胞粘附性檢測 | 甲基化測序 | 基因編輯動物 |
| 細胞劃痕實驗 | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞生物學整體實驗 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞成管實驗 | ||
| 病理檢測 | CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 掃描電鏡 | 基因定點突變細胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射電鏡 | 單基因敲除細胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除細胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫組化 | 目的基因敲入細胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）檢測 | 報告基因敲入細胞系 | SNP芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細胞系 | |
| 免疫熒光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9動物敲除/敲入 | 科研設計指導&文章評估/潤色 |
| 原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文獻論著翻譯 |
| 熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | 論文翻譯潤色服務 |
| 特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍等） | 臨床實驗/科研實驗設計方案指導 | |
| 行為學檢測 | 藥物篩選服務項目 | 藥效學評價 |
| 曠場實驗 | 高通量自動藥物篩選平臺 | 抗腫瘤藥物藥效學評價 |
| 重復性刻板行為檢測 | 細胞高內涵藥物篩選平臺 | 心血管系統藥物藥效學評價 |
| 動物跑臺檢測 | 蛋白質組學靶標研發平臺 | 泌尿系統藥物藥效學評價 |
| 強迫游泳 | 分子藥理研究平臺 | 內分泌系統藥物藥效學評價 |
| 生物膜片鉗藥物篩選平臺 | 抗炎免疫藥物藥效學評價 | |
| 常規藥物體外篩選 |
【本平臺合作項目】
分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務！?
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