BSA酶聯免疫檢測試劑盒

【雙夾心酶聯免疫定量法】

產品貨號： EKT0008

（實驗前請仔細閱讀產品說明書）

聲明：尊敬的客戶，感謝您選用本公司的產品。本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!本試劑盒不含任何具有生物危害成分，但是試劑盒使用涉及的檢測樣本請在具有相應生物安全防護等級實驗室進行，由此可能造成的所有生物安全危害由使用者自行負責。

此定量檢測牛血清白蛋白 (BSA) 酶聯免疫試劑盒，采用抗BSA的單克隆配對抗體，分別作為包被抗體和檢測抗體，組成雙抗體夾心ELISA檢測試劑盒，并與美國標準局的BSA標準品為參照標準，本試劑盒最低可檢測到1ng/mL的BSA。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分！如有疑問，請及時聯系我們。

試劑盒組成：

特別說明：

1.打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整。

2.一周內使用可存于4℃，需長時間保存或多次使用請按保存條件存放。

試驗所需自備物品:

1.酶標儀(450nm波長濾光片)

2.高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

3.37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水

4.吸水紙

洗滌方法:                

1.自動洗板機：每孔加入洗滌液350μL，注入與吸出間隔60秒。

2.手工洗板：甩盡孔內液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μL，浸泡1-2分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體，在厚的吸水紙上拍干。

操作步驟:

1.將濃縮洗滌液用蒸餾水做10倍稀釋。

2.取出包被有抗BSA的96孔酶標板在室溫放置回溫。標準品各濃度做平行兩孔，50 μL/孔加入酶標板中。加待檢樣品、內部參比，各兩孔，50 μL/孔。然后將酶標記抗體用酶標抗體稀釋液做1:100稀釋，加入各反應孔，100 μL/孔（酶標記抗體用多少稀釋多少，現用現配）。加樣過程須在15 min內完成。

3.置室溫20–24℃避光反應1 h，用洗滌液洗滌四遍，拍干。

4.用移液器加TMB底物顯色液100 μL/孔（使用前A、B液等體積混合并恢復至室溫），室溫20–24℃避光反應10 min，請勿震蕩。

5.用移液器加終止液100 μL/孔，稍微震蕩5s混勻。

6.在酶標儀450 nm波長處讀數。

注意事項：

1.如樣品中BSA含量高于32 ng/mL，可將樣品做適當稀釋。

2.樣品如為凍干制劑，應用樣品稀釋液充分溶解混勻。

3.反應時應將整板放入潔凈的密閉空間中，為防止反應孔中落入異物。

4.洗滌拍干后，應消除各孔內殘余的氣泡。

5.開封后，將未使用的板條放回加入干燥劑的密封塑料袋中，置4℃密閉保存。

6.在操作過程中，所使用的移液器吸頭、洗滌機（瓶）、器皿等均應嚴格避免被有BSA的環境和物品污染。

結果判斷:

1.實驗有效參數：

實驗結果須滿足以下有效參數為成立：

0 ng/ml OD值≤0.1； 32 ng/ml OD值≥0.80； 陽性參考18–22 ng/ml； R2≥0.98；
2.計算：

在EXCEL里面以標準濃度為橫坐標，消零OD值為縱坐標作散點圖，添加趨勢線，再顯示曲線方程和R2值，將檢測樣品OD值消零處理后帶入直線方程計算對應的濃度。

3.判定：

在標準曲線中，設OD 0–16 ng/mL為區間A；OD 16–32 ng/mL為區間B；大于OD 32 ng/mL為區間C。

1).如測得的OD值小于標準曲線中2 ng/mL對應OD值，則BSA含量測定結果計為小于2 ng/mL。 
2).如不同稀釋濃度的樣本測得的OD值均位于區間A，則最終結果計算取其最低稀釋度的測定值。
3.如不同稀釋度的測定值均位于區間B或同時位于區間A和B或同時位于區間B和C，則取其最接近OD 16 ng/mL的測定值。
4).如不同稀釋度測定值均位于區間C，則需將樣本做進一步稀釋測定，使其測定值居2 – 32 ng/mL所對應的OD值區間，計算方法按上述7.3.2 – 4。
5).如高稀釋度測得OD高于低稀釋度或未稀釋的樣本OD，則可能是操作失誤或樣本中BSA含量過高（HOOK效應），需重試或調整稀釋度。
6).最終結果要考慮稀釋因素（實際BSA含量＝計算值×稀釋倍數）。

本試劑盒技術指標

1.檢測限和定量限檢測限：零濃度標準品加上兩倍的標準差（20個零孔計算值），本試劑盒檢測限計算為0.2 ng/mL ( ppb )。定量限為標準曲線檢測下限,1 ng/mL。

2.準確度和精密度

計算批內批間變異系數，在高中低三個濃度（20、10、5）下五個重復檢測計算批內變異系數，不同時間重復三次計算批間變異系數，CV%均小于10%。

3.交叉反應

本試劑盒對人血白蛋白，小鼠血清，兔血清，魚明膠沒有交叉反應，而對山羊血清有10%的交叉反應（以相同OD值時BSA和山羊血清的濃度的比值的百分數為準）。

4.鉤狀效應

當樣品濃度遠高于標準曲線最高濃度的時候，會產生HOOK效應，即反應OD值小于32 ng/mL的BSA時候的濃度，本試劑盒為500 μg/mL以上。

僅供科研實驗使用