qiagen74134 RNeasy Plus Mini Kit (50)
For 50 minipreps: RNeasy Mini Spin Columns, gDNA Eliminator Spin Columns, Collection Tubes, RNase-Free Water and Buffers
qiagen74134 RNeasy Plus Mini Kit (50)原理
細胞和易裂解組織首先在含有異硫*酸胍的高變性Buffer RLT Plus中裂解和勻質化，該緩沖液能使RNases立即失活，以保證分離到完整的RNA。裂解液再流過gDNA Eliminator柱。該離心柱與高鹽緩沖液共同作用，可選擇性高效的去除基因組DNA。加入乙醇以提供RNA結合的合適條件，樣本再加入到RNeasy Mini離心柱。含有硅膠膜的特制離心柱能特異性的結合裂解細胞中的RNA。
qiagen74134 RNeasy Plus Mini Kit (50)操作流程
可從多達107個細胞或30 mg組織中純化總RNA。簡潔的工作流程可在25分鐘內純化得到已去除基因組DNA的RNA（參見RNeasy Plus procedure ）。樣本首先被裂解和勻質化。裂解液流過gDNA Eliminator柱，在流過gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇，樣本再加上樣到RNeasy Mini離心柱。RNA結合到膜上，污染物被洗去。獲得高品質RNA，洗脫體積30 ?l或更大。
處理不同的起始樣本可用不同的實驗方案。實驗方案的不同之處主要在于樣本的裂解和勻質化。樣本上樣到gDNA Eliminator柱之后的步驟就類似。此操作流程適合富集mRNA，不包括大部分小于200 nt的RNAs（如rRNAs和tRNAs）。RNeasy Plus操作流程稍作修改后可從培養細胞中純化含miRNA等小RNAs的總RNA。
使用Buffer RLT Plus（RNeasy Plus Mini Kit提供）進行組織破碎和勻質化時，可能會產生過多泡沫。在破碎和勻漿前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX（單獨提供）可充分減少泡沫產生。Reagent DX經仔細檢測，表明配合此試劑盒使用不會影響RNA的純度或下游應用。
qiagen74134 RNeasy Plus Mini Kit (50)應用
RNeasy Plus Mini Kit純化得到的RNA適合對少量DNA敏感的下游應用，如定量real-time RT-PCR。純化得到的RNA還可以用于其他應用。