無內毒素大量質粒提取試劑盒（10preps)
產品名稱： 無內毒素大量質粒提取試劑盒（10preps)
英文名稱： EndoFree plasmid ezFlow maxi kit
產品編號： PD1520-01
產品價格： 0
產品產地： 美國圣地亞哥
品牌商標： Biomiga
更新時間： null
使用范圍： null
- 聯系人 :
- 地址 : 上海市閔行區吳河路328號A棟2樓
- 郵編 : 201109
- 所在區域 : 上海
- 電話 : 400-826-1968 點擊查看
- 傳真 : 點擊查看
- 郵箱 : tech@biomiga.com.cn
產品組成
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Catalog # |
PD1520-00 |
PD1520-01 |
PD1520-02 |
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Preps |
2 |
10 |
25 |
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ezBindTM Columns |
2 |
10 |
25 |
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Buffer A1 |
22 mL |
110 mL |
270 mL |
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Buffer B1 |
22 mL |
110 mL |
270 mL |
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Buffer N3 |
8 mL |
40 mL |
85 mL |
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Buffer KB |
22 mL |
110 mL |
270 mL |
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Buffer RET |
22 mL |
110 mL |
270 mL |
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RNase A(20 mg/mL) |
2.2 mg (110 μL) |
11 mg (550 μL) |
27 mg (1.35 mL) |
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Endofree Elution Buffer |
5 mL |
25 mL |
60 mL |
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User Manual |
1 |
1 |
1 |
注意事項：
1.?????? 質粒拷貝數: 純化中低拷貝的質粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同體積的DNA Wash Buffer和Endofree Elution Buffer.
2.?????? 轉化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養后，再重新挑選新的單個菌落進行培養。
3.?????? 切勿直接取凍存的菌進行培養。
操作簡要步驟：
1.?? 取100 μL新鮮的菌液接種到150-200 mL (勿超過 200 mL)的LB培養基（含適量抗生素），37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
2.?? 加入10 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
3.?? 加入 10 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
4.?? 加入3 mL Buffer N3, 立即反轉5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現白色絮狀沉淀。
5.?? 將離心管轉至高速離心機，在室溫下12,000 x g離心10分鐘（若上清中有白色沉淀，可再次離心）。
6.?? 轉移上清液20 mL（不超過20 mL）至新的50mL離心管中，加入0.5倍體積的Buffer RET (即每20 mL裂解液加入10 mL Buffer RET) 及10 mL的100% ethonal，用手用力甩5次以混勻，需馬上離心過DNA柱。
7.?? 立即轉移20 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中，室溫下> 2,500 x g離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。將剩余溶液轉移至DNA柱中，室溫下> 2,500 x g離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復直至所有的溶液通過DNA柱。
8.?? 可選：向離心柱中加入10 mL Buffer KB，室溫下> 2,500 x g離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
9.?? 向離心柱中加入10 mL 70% 乙醇，室溫下> 2,500 x g離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“
10.????? 將離心柱放回高速離心機中，室溫下5,000 x g開蓋離心10分鐘，以徹底去除殘留的乙醇。
11.????? 將離心柱轉至一個新的50 mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL 的Endofree Elution Buffer，室溫放置1分鐘，> 2,500 x g離心5分鐘，以洗脫質粒DNA。將50 mL離心管中的洗脫液上柱再放置洗脫1分鐘，> 2,500 x g離心5分鐘。 兩次洗脫將提高得率。