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上海吉凱基因醫學科技股份有限公司
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產品名稱: 眼

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眼睛個體小、相對封閉、具備免疫赦免,是基因治療中非常熱門的器官。隨著視網膜和視皮層遺傳性疾病分子機制研究的不斷深入,使用基因治療某些遺傳性眼部疾?。ㄈ缫暰W膜色素變性、缺血性視網膜疾病等)已成為可能。目前使用較多的是通過病毒載體介導將治療基因導入視網膜色素上皮層、視皮層神經元和光感受器等區域,在常見的病毒載體中,腺相關病毒AAV使用較廣泛。
工具病毒選擇指南

眼部研究如何挑選合適的工具病毒

慢病毒、腺病毒和腺相關病毒(AAV)等都是常用的工具病毒載體,在眼部的研究中該如何選擇呢?

1.? 慢病毒:慢病毒的優點是可以將靶基因整合入宿主的基因組中持續穩定的表達,引起的免疫反應較為溫和且安全性高。

2.? 腺病毒:腺病毒的載體容量大于慢病毒和AAV,適合大片段基因的病毒包裝。但腺病毒的免疫原性較大,容易引起動物死亡,且在體表達時間短,不適合需要長期觀察的研究。
3.? 腺相關病毒AAV:AAV具有體積小、滴度高的優勢,病毒顆??蓴U散并感染深層組織,同時其還具有免疫原性低、表達時間長的特點,尤其適合眼部注射的動物實驗。影響AAV載體在眼部基因轉移的因素包括AAV載體的血清型、基因轉移途徑、組織特異性啟動子等。AAV有多種血清型,其中2型、5型、8型、9型等對眼部的趨向性較高。

了解了這些病毒載體在眼部應用中的優勢和不足后,需要根據具體的實驗需求和基因情況選擇合適的病毒載體,吉凱建議您可以從以下這幾個方面出發:

1. 工具載體的表達時間與實驗觀察時間是否相符;

2. 工具載體可以容納的片段大小與目的基因大小是否契合;

3. 工具載體對目的細胞、在體組織的轉導是否足夠高效。


吉凱基因總結了常用基因操作工具的選擇方法,您可以根據具體實驗需求選擇合適的病毒載體:


? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 常用基因操作工具選擇指南

吉凱小建議:

1.? 在基因大小允許的前提下,建議您優先選擇AAV。AAV體積小,滴度高,尤其適合眼部病毒注射。且AAV有多種血清型,其中2型、5型、8型、9型等對眼部的趨向性較高。點擊了解更多AAV血清型選擇小竅門>>


? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? AAV 血清型的趨向性

2.? 可使用組織特異性啟動子提升靶基因的特異性表達,如視網膜特異性啟動子rpe65。吉凱基因提供組織特異性啟動子載體的病毒包裝服務,點擊了解>>

注射方法

工具病毒眼部注射方法

病毒載體介導的眼部基因轉移途徑依治療目的不同主要有玻璃體腔注射、視網膜下注射、前房注射、結膜下注射等。下面以角膜下注射為例做詳細說明:

1、實驗開始前,先將小鼠進行麻醉。
2、然后將小鼠固定在臺上,并將眼球部分突出。
3、夾緊小鼠頭部,并對其角鞏膜緣處進行扎孔。扎孔時,一般選擇角膜緣后1mm 位置,注意避開血管。
4、判斷是否扎孔成功。
5、扎孔成功后,開始注射病毒。
6、注射時,針尖垂直進入,隨后傾斜,緩慢推注。

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 角膜下病毒注射

(參考文獻:Journal of Neuroscience Methods, 2008, 167 (2) :191)

更多部位病毒體內注射操作視頻,點擊查看>>

用量參考

眼部注射病毒用量參考

以下表格中為吉凱客戶應用文獻總結(部分)。更多眼部注射病毒注射參數,點擊查看與下載>>

1.? 腺相關病毒AAV


代表文獻28Science,2010,329(5990):413.


代表文獻29Plos One,2015,10(6):e0128759.


2.? 慢病毒



3.? 腺病毒