服務介紹： 組織芯片免疫熒光染色,是將許多不同處理的組織以規則的微陣列方式排列于同一載體上，同時進行相同指標的免疫熒光檢測。 實驗原理 免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。 實驗步驟 1.石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自來水洗； 2.抗原修復：組織切片置于盛有檸檬酸（PH6.0)抗原修復液的高壓鍋內進行抗原修復，噴氣計時2.5min， 自然冷卻后將玻片置于 PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次 5min； 3.滅活：0.3%甲醇過氧化氫滅活15min，PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次 6min； 4.BSA 或者血清封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內滴加用 5%BSA，室溫封閉 1h； 5.加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，兩種一抗按一定的稀釋比例混合，滴加到組織上，切片平放于濕盒內4°C孵育過夜。（濕盒內加少量水防止抗體蒸發）； 6.加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次8min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬標記的按一定比例配好的二抗覆蓋組織，室溫孵育120min。（兩種不同顏色二抗，按照一定的比例混合孵育）； 7. DAPI染核：滴加 DAPI，室溫孵育10min，之后玻片置于 PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次 6min； 8.封片：抗熒光淬滅劑封片； 9.鏡檢拍照：切片于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（DAPI紫外激發波長330-380nm，發射波長420nm，發藍光；FITC激發波長465-495nm，發射波長515-555 nm，發綠光；CY3激發波長510-560，發射波長590nm，發紅光）。 染色結果判讀：DAPI染出來的細胞核在紫外的激發下為藍色，陽性表達為相應熒光素標記的紅光或者綠光。