三聚*胺（Melamine）定量檢測試劑盒（化學發光法）

六、試劑盒組成

每一個盒中的試劑足夠進行 96 個試驗（包括標準測定），試劑盒中的組份如下：

1、96孔發光板1塊（8孔×12條）：預包被羊抗鼠IgG

2、標準液×6瓶（1ml/瓶）：

0ng/mL、0.1ng/mL、0.3ng/mL、0.9ng/mL、2.7ng/mL、8.1ng/mL

3、11×酶連接物濃縮液（0.6mL）：辣根過氧化物酶標記的克倫特羅濃縮液

4、11×克倫特羅抗體濃縮液（1.3mL）：鼠抗克倫特羅單克隆抗體

5、底物液A（6mL）：過氧化脲

6、底物液B（6mL）：魯米諾

7、濃縮洗滌液（25×）（25mL）：含Tween-20的磷酸鹽緩沖液（PBS）

8、緩沖工作液（25mL）：含穩定成分的磷酸鹽緩沖液（PBS）

9、其他：封板膜2張，自封袋1個，說明書1份

七、樣本處理

處理任何樣本，必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。取50μL清亮尿樣直接測定，如尿樣渾濁3000轉離心10min，取上層清亮尿液測定，暫不使用的樣本應于-20℃冷凍保存。

八、檢測步驟

檢測前的準備

1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置于室溫（20-25℃）平衡30min以上。

2、酶標記物為濃縮液。由于稀釋后酶標記物的弱穩定性，所以只稀釋實際需用量的酶標記物。輕輕搖勻濃縮液，吸取所需數量，用緩沖工作液以1:11（1+10）的比例，稀釋11×酶連接物濃縮液（比如：400μL濃縮液+4.0mL緩沖液，足夠4個微孔板條用）。

3、克倫特羅抗體為濃縮液。由于稀釋后抗體的弱穩定性，所以只稀釋實際需用量的抗體。輕輕搖勻濃縮液，吸取所需數量，用緩沖工作液以1:11（1+10）的比例，稀釋11×克倫特羅抗體濃縮液（比如：400μL濃縮液+4.0mL緩沖液，足夠4個微孔板條用）。

檢測操作

仔細的洗滌非常重要。避免在操作過程中微孔出現干燥。

1、準備：取出需要數量的微孔板，將用剩的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。將微孔板條插入微孔架，標準品和樣品做兩個平行實驗，記錄下標準品和樣品的位置。

2、加抗體：每孔加入100μL稀釋后的抗體溶液，37℃恒溫箱孵育30分鐘。

3、洗板：倒出孔中的液體，將微孔架倒置在干凈吸水紙上拍打，以保證完全除去孔中的液體。每孔加滿稀釋后的洗滌工作液，靜置20秒鐘，甩去液體，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次。

4、加標準品/樣品：加入50μL標準品或處理好的樣品到各自的微孔中，標準品和樣品做兩個平行實驗，然后加入50μL稀釋后的酶連接物到微孔，小心地充分混合，37℃恒溫箱孵育30分鐘。

5、重復3的操作。

6、發光：每孔先加入底物液A 50μL，再加入底物液B 50μL，37℃避光孵育15min。

7、測定：于發光儀上測定每孔發光值。

九、結果判定

（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分發光值率等于標準品或樣本的百分發光值的平均值（雙孔）除以第一個標準（0標準）的發光值，再乘以100%，即

B—標準溶液或樣本溶液的平均發光值

B₀—0ppb標準溶液的平均發光值

（2）標準曲線的繪制與計算

以標準品百分發光率為縱坐標，以克侖特羅標準品濃度（ppb）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分發光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中克侖特羅的實際濃度。

若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來電索取）

十、注意事項

1、嚴格按照說明書操作時間，每加一種試劑前需要將其搖勻，各操作步驟緊湊進行。

2、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20-25℃）會導致所有標準的OD值偏低。

3、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

4、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

5、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

十一、貯存條件及有效期

貯存條件：2-8℃、干燥避光防潮。

保存期：在正確貯存條件下，有效期為6個月。

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