閃晶生物為您提供全套免疫印跡(western blot)技術服務和相關的試劑耗材。主要實驗步驟如下：

蛋白質抽提
實驗對象為組織樣品，取適量（250~500mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑），勻漿后抽提總蛋白（或核蛋白）。
實驗對象為細胞樣品，每份樣品取1×106～1×107細胞，PBS清洗細胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑）抽提總蛋白（或核蛋白）。
2. 蛋白質定量：按BCA蛋白質定量試劑盒操作說明操作，測定樣品濃度。
3. 變性聚丙烯酰胺不連續凝膠電泳(SDS-PAGE):將準備好的樣品液和預染蛋白marker分別上樣，標準加進第一個孔中，電泳分離蛋白。
4. 蛋白質轉移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白轉移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層，30mA恒流條件下，4°C轉移過夜。
5. western blot膜的封閉和抗體孵育

膜在5％脫脂奶粉溶液中室溫孵育1小時以封閉膜上的非特異結合。
封閉過的膜加入一抗室溫孵育1.5小時，抗原抗體結合。
加入HRP標記的二抗體以結合一抗，室溫孵育膜1小時。加入HRP標記的GAPDH抗體可同時檢測GAPDH含量。
6. western blot結果檢測：化學發光法檢測，膜與化學發光底物孵育，經X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件，并用GIS1000分析軟件將圖片上每個特異條帶灰度值的數字化。
7. western blot數據分析：目的蛋白的灰度值除以內參GAPDF的灰度值以校正誤差，所得結果代表某樣品的目的蛋白相對含量。
8. 提供實驗報告，包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結果的相關數據。
更詳細的操作說明
Western Blot操作規程

western blot費用：每張膜上做一種目的蛋白和相應的內參蛋白。每張膜上可以做8個樣品。每張膜的費用是：1500.00元。一抗另計，其它試劑免費，一抗訂購時間約為3周。乘車路線：火車站坐1號地鐵到終點站，然后換5號地鐵坐到北橋站即可。
時間：約2－3周。
Western Blot相關的試劑和耗材: http://www.shinegene.org.cn/service/westernblot.html

Gensynthese Taq DNA Polymerase Taq Polymerase
Gene Synthesis DNA Synthese
Peptide Synthesis

全基因合成 基因合成 密碼子優化 多肽合成

細胞培養 細胞轉染 細胞穩轉 細胞瞬轉

免疫印跡 western blot 蛋白質印跡 病毒構建包裝

載體構建 蛋白表達 蛋白表達純化

詳情請登入 http://www.shinegene.org.cn 或來電 021-54460832 / 61990275

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