產品簡介

翌圣小鼠CD4+T細胞分選試劑盒（陰選）是通過陰性分選法從小鼠淋巴結、脾臟及其混合樣本中分離、純化CD4+T細胞。其原理是選用生物素（biotin）標記單克隆抗體Cocktail對非目標細胞（非CD4+T細胞）進行標記，而后通過鏈霉親和素（streptavidin）標記的磁珠對非目標細胞進行清除，從而得到無磁珠標記的小鼠CD4+T細胞。

產品特點

操作簡單：無需分選柱，使用磁性分離器即可實現目的細胞的分離。

純度高：分選細胞純度可達95%以上；

活性好：陰性分選，磁珠不與細胞直接接觸，分選后細胞無異常激活，不影響下游實驗。

速度快：15分鐘即可分選得到目的細胞。

產品信息

儲存條件

2~8℃保存，有效期1年，嚴禁凍存。

使用說明

1. 所需材料準備

1）分離緩沖液：含有 2 mM EDTA和2%胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需預先通過0.22 μm濾膜過濾除菌。

2）分選材料和分離器：無菌流式管或離心管，磁性分離器。

1. 細胞分選，以分選小鼠脾臟CD4+T細胞為例：

1）制備單細胞懸液：在70 μm細胞篩網上研磨脾臟，以預冷的PBS沖洗細胞篩網，收集細胞懸液于50 mL離心管中，2000 rpm（500 g），離心5 min。

2）離心結束，棄上清，加入5 mL紅細胞裂解液，吹打混勻，室溫裂解 5 min，再加入20 mL PBS終止反應，2000 rpm（500 g），離心5 min。

注意：紅細胞裂解步驟可根據所用裂解液不同調整用量及時間。少量紅細胞殘留不會影響后續分選及細胞純度。 

3）離心完成后，棄上清，將脾細胞重懸于PBS，細胞懸液用70 μm細胞篩網過濾后，計數。計數完成后，2000 rpm（500 g），離心 5 min。

注意：細胞懸液需要過細胞篩網，以除去組織和細胞團塊，否則會影響后續細胞分選純度。

4）離心完成后，棄上清，將細胞重懸于分離緩沖液中，調整細胞密度為 1×10⁸ cells/mL。

5） 吸取100 μL細胞懸液（1×10⁷ cells）加入無菌流式管底部，再加入2 μL Mouse CD4+T Cell Negative Antibody Cocktail（37657-A），混勻后 4°C孵育 10 min。

注意：加入細胞懸液時將細胞加入流式管底部，避免沿流式管管壁加入。根據所使用磁力架不同也可使用離心管進行細胞分選。

如果分選更多細胞，則按比例增加 Mouse CD4+T Cell Negative Antibody Cocktail（37657-A）的用量。 

6）孵育完成后，在流式管中加入20 μL清洗過的Streptavidin Magnetic Beads（37657-B）, 混勻后 4°C 孵育10 min。

注意：磁珠使用前需用分離緩沖液進行清洗：渦旋振蕩重懸磁珠，吸取實驗需要的磁珠至1.5 mL離心管，加入 1 mL分離緩沖液，10000 g 離心 1min，棄上清。加入 1 mL分離緩沖液重復洗滌磁珠1次后用與原來相同體積的分離緩沖液重懸磁珠。如吸取20 μL磁珠進行清洗，則清洗后用 20 μL 分離緩沖液進行重懸）。

如果分選更多細胞，則按比例增加Streptavidin Magnetic Beads（37657-B）用量。

如果分選少于 1×10⁷ cells，則將細胞懸液體積補至 100 μL，加入 2 μL Mouse CD4+T Cell Negative Antibody Cocktail（37657-A）和      20 μL Streptavidin Magnetic Beads（37657-B）。

7）孵育完成后，在流式管中加入2.5 mL分離緩沖液，用移液器上下混合吹打5次混勻（避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻）。

8）將含有細胞的分選流式管置于磁力架上，靜置 5 min。

9）將細胞懸液輕柔倒入一個無菌離心管中（傾倒過程中流式管不要脫離磁力架），此細胞懸液中即包含純化的小鼠CD4 + T 細胞，2000 rpm（500 g），離心 5 min。離心后棄上清，收集細胞。

10）根據實驗需要洗滌細胞后，將細胞重懸于所需緩沖液或培養基中，即可用于后續分子生物學或細胞生物學實驗。

注意事項

1. Negative Antibody Cocktail和Streptavidin Magnetic Beads使用和保存過程中應避免冷凍；

2. 建議選用低吸附離心管和吸頭，避免因吸附造成磁珠和抗體的損耗；

3. 本產品需與磁性分離器配套使用；

4. 本產品僅作科研用途！

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

Ver.CN20250320