離心法質(zhì)粒中量提取試劑盒I（10Preps）
產(chǎn)品名稱： 離心法質(zhì)粒中量提取試劑盒I（10Preps）
英文名稱： Plasmid midi kit
產(chǎn)品編號： PD1411-01
產(chǎn)品價格： 0
產(chǎn)品產(chǎn)地： 美國圣地亞哥
品牌商標(biāo)： Biomiga
更新時間： null
使用范圍： null
Biomiga（中國）
- 聯(lián)系人 :
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- 郵編 : 201109
- 所在區(qū)域 : 上海
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- 郵箱 : tech@biomiga.com.cn
試劑盒組分：
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Catalog |
PD1411-01 |
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Preps |
10 |
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ezBindTM Columns |
10 |
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Buffer A1 |
30 mL |
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Buffer B1 |
30 mL |
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Buffer C1 |
35 mL |
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Buffer KB |
35 mL |
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RNase A (20 mg/mL) |
3?mg (150 μL) |
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Elution Buffer |
25?mL |
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User Manual |
1 |
保存條件：
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RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。
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注意事項：
- 質(zhì)粒拷貝數(shù)：純化中低拷貝的質(zhì)粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同體積的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer.
- 轉(zhuǎn)化菌：若為-70oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個菌落進(jìn)行培養(yǎng)。切勿直接取凍存在4oC的菌進(jìn)行培養(yǎng)。
- 柱結(jié)合能力：250 μg
操作步驟：
- 培養(yǎng)14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入2.5 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細(xì)菌沉淀重新懸浮。
- 加入 2.5 mL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
- 加入3.0 mL Buffer C1, 立即反轉(zhuǎn)5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
- 將離心管轉(zhuǎn)至高速離心機(jī)，在室溫下14,000 x g 離心10分鐘（若上清中有白色沉淀，可再次離心）。
- 小心吸取離心后的上清液至15 mL管中（避免吸起沉淀），加入3.0 mL 100% 乙醇，立即搖勻，需馬上離心過DNA柱。
- 立即轉(zhuǎn)移6.0 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中，室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)此步直至所有的溶液通過DNA柱。
- 可選: 向DNA柱中加入 3.0 mL Buffer KB, 室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
- 向離心柱中加入4.0 mL 70% 乙醇，室溫下>2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“9”。
- 將離心柱放回高速離心機(jī)中，室溫下>2,500 x g 開蓋離心10分鐘，以徹底去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉(zhuǎn)至一個新的15 mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入0.5 mL滅菌ddH2O（pH在7.0-8.5之間）或Elution Buffer，室溫放置1分鐘，>2,500 x g離心5分鐘，以洗脫質(zhì)粒DNA。若想提高得率，將15 mL離心管中的洗脫液再加到柱的中間，>2,500 x g離心5分鐘以洗脫質(zhì)粒DNA。
操作流程：
