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<p>&lt;div id="a1" class="tab-pane active"&gt; &lt;div id="d1" class="p2"&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;細胞介紹&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;LN-18 是一種表現出上皮樣形態的細胞系，于 1976 年從一名患有膠質母細胞瘤的 65 歲白人男性患者的右顳葉中分離出來,在裸鼠中形成腫瘤,可用于神經科學研究。細胞的神經膠質原纖維酸性蛋白和 S100 (S-100) 蛋白呈陰性。這些細胞表現出 p53 (TP53) 突變，并且 p16 和 p14ARF 腫瘤抑制基因可能存在純合缺失。它們具有野生型 PTEN 基因。Fas 配體刺激細胞會在 16 小時內導致細胞凋亡。嘌呤霉素也以劑量依賴性方式殺死細胞。Bcl-2 保護這些細胞免遭 Fas 配體誘導的細胞死亡，但對嘌呤霉素誘導的細胞凋亡僅具有很小的保護作用。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;細胞特性&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;1）&amp;nbsp;來源：腦;&amp;nbsp;大腦;&amp;nbsp;右顳葉&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;2）&amp;nbsp;形態：上皮細胞樣&amp;nbsp;&amp;nbsp;貼壁生長&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;3）&amp;nbsp;含量：&amp;gt;1x106&amp;nbsp;&amp;nbsp;細胞數&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;4）&amp;nbsp;規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;5）用途：僅供科研使用。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;運輸和保存&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;干冰運輸及復蘇好存活細胞&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;細胞接收后的處理&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。 &lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10&amp;times;，20&amp;times;）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。&amp;nbsp;&amp;nbsp;收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。&lt;/strong&gt;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;一．培養基及培養凍存條件準備&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="color: #c00000; font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;1）&amp;nbsp;準備DMEM （推薦iCell-0001）培養基；優質胎牛血清，5%；雙抗，1%。&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="color: #c00000; font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;2）&amp;nbsp;培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;3）&amp;nbsp;凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;二．&amp;nbsp;細胞處理&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;1）&amp;nbsp;凍存細胞的復蘇&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;2）&amp;nbsp;細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;1.&amp;nbsp;棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;2.&amp;nbsp;加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;3.&amp;nbsp;輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;&lt;strong&gt;下面T25瓶為例；&lt;/strong&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;1.&amp;nbsp;細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1&amp;times;10^6~1&amp;times;10^7個活細胞/ml.&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1&amp;times;10^6~1&amp;times;10^7個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;p&gt;&lt;span style="font-size: 20px;"&gt;3.&amp;nbsp;將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; &lt;/div&gt; &lt;/div&gt;</p>