熱蛋白組分析技術（Thermal Proteome Profiling，TPP）是一種基于蛋白質熱穩定性變化的原理來研究蛋白質-小分子相互作用、蛋白質功能調控及疾病機制的高通量靶點篩選技術。譜度眾合公司推出的TPP藥物靶點篩選解決方案，包含以下幾種實驗方案：

• 經典流程TPP-TR（溫度梯度蛋白熱位移分析）：通過溫度梯度（Temperature Range, TPP-TR）實驗，構建蛋白熱熔曲線，分析藥物處理組與對照組間的蛋白熱位移（ΔTm），篩選潛在藥物作用靶點。
• 經典流程TPP-CCR（化合物濃度梯度蛋白熱位移分析）：通過化合物濃度梯度（Compound Concentration Range, TPP-CCR）實驗，構建蛋白熱熔曲線，分析最高濃度藥物處理樣本與對照樣本間發生顯著穩定性變化的蛋白，篩選潛在藥物作用靶點。
• 簡化流程TPP-ITSA（等溫位移分析）：通過等溫位移分析（Isothermal Shift Assay, ITSA）實驗，比較藥物處理組與對照組在單溫度刺激下的蛋白變性水平差異（熱穩定性變化），篩選潛在藥物作用靶點。
• 簡化流程TPP-PISA（蛋白質組積分溶解度改變）：通過蛋白質組積分溶解度改變（Proteome Integral Solubility Alteration, PISA）實驗，比較藥物處理組與對照組在多個溫度刺激下的混合樣本的蛋白變性水平差異（熱穩定性變化），篩選潛在藥物作用靶點。

技術原理

蛋白質在加熱過程中會逐漸去折疊（變性），暴露出內部疏水氨基酸殘基，進而發生沉淀。配體結合會改變蛋白質的熱穩定性，導致其熔解溫度（Tm，蛋白發生一半變性沉淀時的溫度）發生偏移。需要注意的是，大多數蛋白與配體結合后穩定性提高，表現出正向變化，但也有少數蛋白與配體結合后穩定性降低，表現出負向變化。

產品優勢

• 簡單便捷：無需設計合成分子探針，只需提供野生型細胞/組織和藥物分子即可進行實驗。
• 適用性強：TPP技術適用于多種類型的藥物分子（小分子化合物、多肽等）與實驗條件(體內外藥物處理）。
• 數據驅動：利用高通量的質譜技術，無偏見地篩選數據，保障獲得真實的陽性結果，實現治療靶點與脫靶靶點的全覆蓋。
• 直接結論：通過比較篩選、生信分析和數據庫挖掘，報告直接給出推薦的靶點列表清單。
• 驗證數據：對潛在靶蛋白與藥物分子進行分子對接，在計算機模擬層面對藥物靶點進行驗證。

產品介紹

常規流程TPP

客戶提供野生型或疾病模型的細胞/組織及藥物（或經藥物處理后的細胞/組織），譜度眾合實驗室在非變性條件下提取樣本中的蛋白，隨后進行TPP實驗。此常規流程TPP需要在37-67℃(哺乳動物蛋白變性范圍)間設置6-10個溫度處理點，將藥物處理組與溶劑處理組樣本分別置于這些溫度點下進行熱處理。通過離心分離各樣本中的變性組分（蛋白沉淀），通過質譜對各樣本中溶液上清中的蛋白進行定量檢測，分析藥物作用后蛋白組的熱位移變化，篩選藥物作用靶點。

送樣要求：

1. 12-40個樣本（（藥物處理組+溶劑對照組）* Pt(溫度梯度點)；如需增加不同濃度或者不同藥物處理組，每組增加Pt個樣本）；理論上TPP各實驗組在不同溫度處理下的樣本可以看作重復，因此常規流程TPP通常可以不設置重復實驗或者僅設置兩組重復。
2. 實驗組與對照組每組細胞總量建議>2*10^7（組織樣本＞10mg）;藥物用量：1μmol左右粉末或20μL藥物母液（100×處理濃度）。藥物質量計算：1μmol =(摩爾分子質量) μg，例如分子量1000 Da的藥物，需要1mg的量。
3. 收集細胞/組織樣本時需以PBS清洗干凈，保留細胞沉淀/去浮水組織，樣本不含有任何去垢劑/變性劑成分。

簡化流程TPP

客戶提供原始的野生型或疾病模型的細胞/組織及藥物，譜度眾合實驗室在非變性條件下提取樣本中的蛋白，對蛋白提取物進行藥物/溶劑對照處理。對樣本進行單溫度熱處理（哺乳動物樣本建議48-56℃），通過離心分離各樣本中的變性組分（蛋白沉淀），通過質譜對各樣本中溶液上清的蛋白進行定量檢測，分析藥物作用后蛋白組的熱穩定性變化，篩選藥物作用靶點。

送樣要求：

1. 6-10個給藥前樣本（藥物處理組與溶劑對照組各3-5個重復；如需增加不同濃度或者不同藥物處理組，每組增加3-5個樣本）。
2. 實驗組與對照組每組細胞總量建議>1*10^7（組織樣本＞5mg）;藥物用量：1μmol左右粉末或10μL藥物母液（100×處理濃度）。
3. 收集細胞/組織樣本時需以PBS清洗干凈，保留細胞沉淀/去浮水組織，樣本不含有任何去垢劑/變性劑成分。

報告結果

我們將TPP的實驗結果分成四個板塊進行展示。其中第一部分是質譜檢測結果的質控；第二部分TPP數據分析及候選靶點篩選結果，也是文章里使用的主要結果；第三部對篩選出的候選靶點進行功能富集分析與潛在靶點挖掘，輔助我們進行靶點篩選與驗證。第四部分分子對接提供靶蛋白與藥物分子的結合能信息，可以作為輔助驗證的結果。

1.項目質控及基礎檢測數據結果

展示項目定量到的unique肽段數目及其歸屬的unique蛋白。TPP實驗中蛋白鑒定和定量水平會呈現出溫度梯度變化。

2.潛在藥物靶點篩選結果

對藥物處理組與溶劑對照組樣本的蛋白定量數據進行差異倍數計算和T檢驗，篩選出藥物作用后發生熱穩定性變化的蛋白，即為潛在的藥物作用靶點。

3.功能分析與潛在靶點挖掘

4.潛在藥物靶點分子對接

譜度眾合是一家由武漢大學博士團隊創辦的科研服務企業，我們專注于利用質譜技術服務于生物標志物、藥物靶點篩選、基礎研究等蛋白質研究領域，我們在本專業細分領域持續深耕十幾年，針對具體研究場景開發多種面向具體研究目的和論文發表需求的服務產品，助力于客戶更輕松更高效的完成科研目標。

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