熱蛋白組分析技術(shù)（Thermal Proteome Profiling，TPP）是一種基于蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性變化的原理來(lái)研究蛋白質(zhì)-小分子相互作用、蛋白質(zhì)功能調(diào)控及疾病機(jī)制的高通量靶點(diǎn)篩選技術(shù)。譜度眾合公司推出的TPP藥物靶點(diǎn)篩選解決方案，包含以下幾種實(shí)驗(yàn)方案：

• 經(jīng)典流程TPP-TR（溫度梯度蛋白熱位移分析）：通過(guò)溫度梯度（Temperature Range, TPP-TR）實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建蛋白熱熔曲線，分析藥物處理組與對(duì)照組間的蛋白熱位移（ΔTm），篩選潛在藥物作用靶點(diǎn)。
• 經(jīng)典流程TPP-CCR（化合物濃度梯度蛋白熱位移分析）：通過(guò)化合物濃度梯度（Compound Concentration Range, TPP-CCR）實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建蛋白熱熔曲線，分析最高濃度藥物處理樣本與對(duì)照樣本間發(fā)生顯著穩(wěn)定性變化的蛋白，篩選潛在藥物作用靶點(diǎn)。
• 簡(jiǎn)化流程TPP-ITSA（等溫位移分析）：通過(guò)等溫位移分析（Isothermal Shift Assay, ITSA）實(shí)驗(yàn)，比較藥物處理組與對(duì)照組在單溫度刺激下的蛋白變性水平差異（熱穩(wěn)定性變化），篩選潛在藥物作用靶點(diǎn)。
• 簡(jiǎn)化流程TPP-PISA（蛋白質(zhì)組積分溶解度改變）：通過(guò)蛋白質(zhì)組積分溶解度改變（Proteome Integral Solubility Alteration, PISA）實(shí)驗(yàn)，比較藥物處理組與對(duì)照組在多個(gè)溫度刺激下的混合樣本的蛋白變性水平差異（熱穩(wěn)定性變化），篩選潛在藥物作用靶點(diǎn)。

技術(shù)原理

蛋白質(zhì)在加熱過(guò)程中會(huì)逐漸去折疊（變性），暴露出內(nèi)部疏水氨基酸殘基，進(jìn)而發(fā)生沉淀。配體結(jié)合會(huì)改變蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性，導(dǎo)致其熔解溫度（Tm，蛋白發(fā)生一半變性沉淀時(shí)的溫度）發(fā)生偏移。需要注意的是，大多數(shù)蛋白與配體結(jié)合后穩(wěn)定性提高，表現(xiàn)出正向變化，但也有少數(shù)蛋白與配體結(jié)合后穩(wěn)定性降低，表現(xiàn)出負(fù)向變化。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

• 簡(jiǎn)單便捷：無(wú)需設(shè)計(jì)合成分子探針，只需提供野生型細(xì)胞/組織和藥物分子即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
• 適用性強(qiáng)：TPP技術(shù)適用于多種類型的藥物分子（小分子化合物、多肽等）與實(shí)驗(yàn)條件(體內(nèi)外藥物處理）。
• 數(shù)據(jù)驅(qū)動(dòng)：利用高通量的質(zhì)譜技術(shù)，無(wú)偏見(jiàn)地篩選數(shù)據(jù)，保障獲得真實(shí)的陽(yáng)性結(jié)果，實(shí)現(xiàn)治療靶點(diǎn)與脫靶靶點(diǎn)的全覆蓋。
• 直接結(jié)論：通過(guò)比較篩選、生信分析和數(shù)據(jù)庫(kù)挖掘，報(bào)告直接給出推薦的靶點(diǎn)列表清單。
• 驗(yàn)證數(shù)據(jù)：對(duì)潛在靶蛋白與藥物分子進(jìn)行分子對(duì)接，在計(jì)算機(jī)模擬層面對(duì)藥物靶點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證。

產(chǎn)品介紹

常規(guī)流程TPP

客戶提供野生型或疾病模型的細(xì)胞/組織及藥物（或經(jīng)藥物處理后的細(xì)胞/組織），譜度眾合實(shí)驗(yàn)室在非變性條件下提取樣本中的蛋白，隨后進(jìn)行TPP實(shí)驗(yàn)。此常規(guī)流程TPP需要在37-67℃(哺乳動(dòng)物蛋白變性范圍)間設(shè)置6-10個(gè)溫度處理點(diǎn)，將藥物處理組與溶劑處理組樣本分別置于這些溫度點(diǎn)下進(jìn)行熱處理。通過(guò)離心分離各樣本中的變性組分（蛋白沉淀），通過(guò)質(zhì)譜對(duì)各樣本中溶液上清中的蛋白進(jìn)行定量檢測(cè)，分析藥物作用后蛋白組的熱位移變化，篩選藥物作用靶點(diǎn)。

送樣要求：

1. 12-40個(gè)樣本（（藥物處理組+溶劑對(duì)照組）* Pt(溫度梯度點(diǎn))；如需增加不同濃度或者不同藥物處理組，每組增加Pt個(gè)樣本）；理論上TPP各實(shí)驗(yàn)組在不同溫度處理下的樣本可以看作重復(fù)，因此常規(guī)流程TPP通常可以不設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)或者僅設(shè)置兩組重復(fù)。
2. 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組每組細(xì)胞總量建議>2*10^7（組織樣本＞10mg）;藥物用量：1μmol左右粉末或20μL藥物母液（100×處理濃度）。藥物質(zhì)量計(jì)算：1μmol =(摩爾分子質(zhì)量) μg，例如分子量1000 Da的藥物，需要1mg的量。
3. 收集細(xì)胞/組織樣本時(shí)需以PBS清洗干凈，保留細(xì)胞沉淀/去浮水組織，樣本不含有任何去垢劑/變性劑成分。

簡(jiǎn)化流程TPP

客戶提供原始的野生型或疾病模型的細(xì)胞/組織及藥物，譜度眾合實(shí)驗(yàn)室在非變性條件下提取樣本中的蛋白，對(duì)蛋白提取物進(jìn)行藥物/溶劑對(duì)照處理。對(duì)樣本進(jìn)行單溫度熱處理（哺乳動(dòng)物樣本建議48-56℃），通過(guò)離心分離各樣本中的變性組分（蛋白沉淀），通過(guò)質(zhì)譜對(duì)各樣本中溶液上清的蛋白進(jìn)行定量檢測(cè)，分析藥物作用后蛋白組的熱穩(wěn)定性變化，篩選藥物作用靶點(diǎn)。

送樣要求：

1. 6-10個(gè)給藥前樣本（藥物處理組與溶劑對(duì)照組各3-5個(gè)重復(fù)；如需增加不同濃度或者不同藥物處理組，每組增加3-5個(gè)樣本）。
2. 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組每組細(xì)胞總量建議>1*10^7（組織樣本＞5mg）;藥物用量：1μmol左右粉末或10μL藥物母液（100×處理濃度）。
3. 收集細(xì)胞/組織樣本時(shí)需以PBS清洗干凈，保留細(xì)胞沉淀/去浮水組織，樣本不含有任何去垢劑/變性劑成分。

報(bào)告結(jié)果

我們將TPP的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分成四個(gè)板塊進(jìn)行展示。其中第一部分是質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)控；第二部分TPP數(shù)據(jù)分析及候選靶點(diǎn)篩選結(jié)果，也是文章里使用的主要結(jié)果；第三部對(duì)篩選出的候選靶點(diǎn)進(jìn)行功能富集分析與潛在靶點(diǎn)挖掘，輔助我們進(jìn)行靶點(diǎn)篩選與驗(yàn)證。第四部分分子對(duì)接提供靶蛋白與藥物分子的結(jié)合能信息，可以作為輔助驗(yàn)證的結(jié)果。

1.項(xiàng)目質(zhì)控及基礎(chǔ)檢測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果

展示項(xiàng)目定量到的unique肽段數(shù)目及其歸屬的unique蛋白。TPP實(shí)驗(yàn)中蛋白鑒定和定量水平會(huì)呈現(xiàn)出溫度梯度變化。

2.潛在藥物靶點(diǎn)篩選結(jié)果

對(duì)藥物處理組與溶劑對(duì)照組樣本的蛋白定量數(shù)據(jù)進(jìn)行差異倍數(shù)計(jì)算和T檢驗(yàn)，篩選出藥物作用后發(fā)生熱穩(wěn)定性變化的蛋白，即為潛在的藥物作用靶點(diǎn)。

3.功能分析與潛在靶點(diǎn)挖掘

4.潛在藥物靶點(diǎn)分子對(duì)接

譜度眾合是一家由武漢大學(xué)博士團(tuán)隊(duì)創(chuàng)辦的科研服務(wù)企業(yè)，我們專注于利用質(zhì)譜技術(shù)服務(wù)于生物標(biāo)志物、藥物靶點(diǎn)篩選、基礎(chǔ)研究等蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域，我們?cè)诒緦I(yè)細(xì)分領(lǐng)域持續(xù)深耕十幾年，針對(duì)具體研究場(chǎng)景開(kāi)發(fā)多種面向具體研究目的和論文發(fā)表需求的服務(wù)產(chǎn)品，助力于客戶更輕松更高效的完成科研目標(biāo)。

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