E.coli Rosetta(DE3) 感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌E.coli Rosetta(DE3) 感受態細胞菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。補充6種稀有密碼子（AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA），提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統中的表達水平。

基因型：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE(argU，argW，ileX，glyT，leuW，proL)(CamR)

特點：1. 含有pRARE質粒，補充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)對應的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統中的表達水平。2. 菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區 (DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶)，同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。具氯霉素抗性。pUC19質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。

3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。

4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。

5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1. 剛化凍的細胞轉化效率最高，避免反復化凍。

2. 整個動作要輕柔。

3.?質粒質量和濃度等的差異會使轉化效率有所下降。

*本試劑僅供實驗室研究使用