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外泌體是直徑30–150納米的細胞分泌囊泡，廣泛存在于血液、尿液及其他體液中。它們富含蛋白質、RNA和脂質，作為細胞間信號傳遞的重要媒介，在疾病診斷、藥物靶點發現及治療研究中具有巨大價值。隨著質譜技術的發展，高通量、精準的蛋白定量分析方法成為外泌體研究的核心工具。其中，TMT（Tandem Mass Tag）標記定量和DIA（Data-Independent Acquisition）數據獨立采集技術因其高靈敏度、可重復性和覆蓋率而受到廣泛關注。

一、外泌體定量蛋白質組分析的核心意義

外泌體定量蛋白質組分析不僅能揭示細胞狀態，還能發現疾病相關生物標志物、藥物靶點以及細胞間通信網絡。相比蛋白質組學，外泌體樣本量小、蛋白種類低豐度蛋白多，因此高靈敏、高覆蓋率的定量方法顯得尤為重要。

TMT 和 DIA 技術在這一領域的優勢如下：

• TMT：支持多樣本同時定量，便于比較不同處理條件或疾病狀態。
• DIA：實現高重現性和深度覆蓋，尤其適合復雜生物樣本的系統分析。

二、外泌體樣本制備與蛋白提取

在進行 TMT/DIA 定量之前，外泌體樣本的高質量制備是關鍵。主要流程包括：

1、外泌體分離

常用方法：

• 超速離心：多級離心去除細胞碎片和大顆粒，獲得沉淀外泌體。
• 密度梯度離心：利用蔗糖或碘梯度提高純度，適合蛋白組學分析。
• 免疫親和法：通過CD63/CD9/CD81抗體選擇性捕獲，適合低豐度蛋白檢測。

2、蛋白提取

外泌體蛋白量有限，需要使用高效裂解緩沖液（含去污劑和蛋白酶抑制劑）：

• 確保膜蛋白充分溶解。
• 保持蛋白修飾狀態完整。

3、蛋白定量

常用 BCA 法或Bradford 法進行精確定量，為后續 TMT 或 DIA 分析提供準確蛋白輸入量。

三、TMT 標記定量策略

1、原理簡介

TMT 是一種同位素標記技術，通過化學修飾在肽段 N 端或賴氨酸殘基引入標記，實現多樣本的相對定量。每個標記具有相同質荷比（m/z），在質譜碎片化后釋放不同的報告離子（Reporter Ion）信號，用于定量比較。

2、TMT 流程

• 蛋白酶解：常用胰蛋白酶將蛋白切割成肽段。
• 肽段標記：將各實驗組肽段分別與不同 TMT 標簽反應。
• 樣本混合：將標記肽段混合，統一進行 LC-MS/MS 分析。
• 質譜分析：使用高分辨率 Orbitrap 或 Q-Exactive 系統進行 DDA 數據采集。
• 數據解析：通過數據庫搜索和 Reporter Ion 定量分析，獲得多樣本相對定量結果。
• 可同時分析 6–18 個樣本，節省質譜運行時間。
• 避免批次效應，提高實驗可重復性。
• 適合臨床樣本對照、藥物處理或疾病分型研究。

1、原理簡介

DIA 是一種非選擇性采集方式，將質譜掃描窗口覆蓋樣本中所有肽段，實現“全譜采集”。通過建立肽庫或直接分析譜圖，DIA 能夠高效、準確地進行蛋白定量。

2、DIA 流程

• 蛋白酶解與肽段制備：與 TMT 類似，但無需標記。
• 液相色譜分離：將復雜肽段樣本分離后送入質譜。
• DIA 采集：在預設質量窗口內連續采集所有肽段信號。
• 數據分析：利用Spectronaut或DIA-NN等軟件解析數據，實現蛋白定量與鑒定。
• 高重復性，適合多批次分析。
• 無需標記，適合低豐度樣本。
• 深度覆蓋，可檢測低豐度和膜蛋白。
• 支持時間序列、處理組和復雜疾病模型研究。

五、數據分析與生物學解讀

外泌體定量蛋白質組數據需要經過系統分析：

1、蛋白鑒定與定量：通過 UniProt 數據庫及 MaxQuant、Spectronaut 軟件完成。

2、統計分析：包括差異蛋白篩選、聚類分析、PCA 可視化。

3、功能注釋：GO 富集、KEGG 通路分析、蛋白互作網絡構建。

4、臨床/機制關聯：與疾病表型或藥物處理結果進行關聯分析，發現潛在標志物或作用機制。

利用 TMT 和 DIA 技術進行外泌體定量蛋白質組分析，為疾病生物標志物發現、藥物作用機制研究及再生醫學提供了強有力的工具。百泰派克生物科技結合 TMT 與 DIA 平臺，提供優化的外泌體定量蛋白質組全流程服務，從樣本制備到數據分析，實現高靈敏度、可重復的科研解決方案。隨著技術的發展，外泌體定量蛋白組學將在精準醫學、腫瘤早期診斷和個性化治療中發揮越來越重要的作用。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對蛋白質序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對蛋白質的氨基酸組成分析，N端測序，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白質N端序列分析服務。對于未知理論序列的蛋白質，提供基于從頭測序法的蛋白質從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白質組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白質組學、靶向蛋白質組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白質組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白質組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種蛋白質標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.專業生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，最后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術先進，填補技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從最小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從蛋白質、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等專業服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，專業提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋蛋白質組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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