RT-PCR技術服務
產品名稱： RT-PCR技術服務
英文名稱： RT-PCR技術服務
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反轉錄PCR（Reverse transcriptase PCR,RT-PCR）是一種從RNA擴增cDNA拷貝的方法。RT-PCR對于獲得與克隆mRNA的5’、3’末端序列和從非常少量的mRNA樣品構建大容量的cDNA文庫方面都是極為靈敏與通用的方法。此外，RT-PCR還易于鑒定已轉錄序列是否發生突變及呈現多態性，還可用于測定基因表達的強度。我公司采用二步RT-PCR法，可滿足客戶不同的實驗要求。
樣品要求：提供的樣品要新鮮并盡可能多，不推薦提供RNA樣品，或者提供cDNA，并盡可能詳細的提供背景資料（基因序列、Genebank accession number擴增產物的用途等）。
基本步驟
●?模板制備：見RNA提取技術服務。
●?引物設計
????客戶提供上、下游引物，或者我公司提供免費的引物設計及合成（包括RT-PCR半定量檢測中的內參引物）。
●?反轉錄
（1）Microtube管中配制下列模板RNA/引物混合液，全量<15 μl。
?
| ?試劑名稱 | ?使用量 |
| ?模板RNA | ?2μg |
| ?Oligo(dT)12-18 Primer（50μM） | ?2.5μl |
（2）70℃保溫5分鐘后迅速在冰上急冷2分鐘以上。?
（3）離心數秒鐘使模板RNA/引物的變性溶液聚集于Microtube管底部。?
（4）在上述Microtube管中配制下列反轉錄反應液。
?
| ?試劑名稱 | ?使用量 |
| ?上述模板RNA/引物變性溶液 | ? |
| ?5×M-MLV Buffer | ?5μl |
| ?dNTP Mixture（各10 mM） | ?1.25μl |
| ?RNase Inhibitor（40 U/μl?） | ?25U |
| ?M-MLV（200 U/μl?） | ?200U?? |
| ?RNase free dH2O | ?up to 25μl |
42℃保溫1小時。?
（5）70℃保溫15分鐘后冰上冷卻，得到cDNA溶液。
若需要表達，參考基因表達服務。若需要進行RT-PCR半定量分析，接著以下的操作。
●?RT-PCR半定量分析
PCR擴增目的基因及看家基因，產物經過瓊脂糖凝膠電泳后進行灰度掃描分析。
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RNA模板的制備需另收費（見RNA提取服務）以上為1個目的基因的報價。進行相對定量分析時，同一材料的多個目的基因的價格=1個目的基因價格×目的基因個數。
提供結果
完整的實驗操作步驟、電泳圖、定量分析結果等。
本公司可提供實驗代做服務！
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