Duolink? PLA?技術(shù)—新型蛋白研究工具，前沿科研領(lǐng)域之星
您是否正在研究低豐度蛋白但找不到合適的檢測(cè)方法？
您是否正在研究蛋白相互作用但得不到令人信服的結(jié)果？
您是否擔(dān)心蛋白過(guò)表達(dá)或融合標(biāo)簽后會(huì)改變其原有的功能？
現(xiàn)在，您再也不用擔(dān)心了，因?yàn)橛辛薉uolink? PLA?技術(shù)，所有這些問(wèn)題都將迎刃而解。
Duolink?實(shí)驗(yàn)基于鄰位連接技術(shù)（Proximity Ligation Assay, PLA），當(dāng)一對(duì)PLA probes足夠接近時(shí)（<40 nm）會(huì)產(chǎn)生PLA信號(hào)，PLA信號(hào)的位置直接反映了蛋白表達(dá)量或蛋白復(fù)合體的亞細(xì)胞定位。
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Duolink? PLA?技術(shù)特點(diǎn)：
> 更真實(shí)：內(nèi)源表達(dá)水平檢測(cè)，不改造、修飾細(xì)胞
> 靈敏度高：信號(hào)擴(kuò)增使其具有單分子級(jí)靈敏度
> 更精確：兩種一抗同時(shí)識(shí)別，極大提高特異性
> 原位顯示：同時(shí)完成目的蛋白的定位、定量檢測(cè)
> 高通量：使用多孔板和配套軟件實(shí)現(xiàn)高通量篩選
> 簡(jiǎn)單快捷：無(wú)需裂解細(xì)胞、純化蛋白或WB檢測(cè)
Duolink? 應(yīng)用舉例
1、 檢測(cè)穩(wěn)定、瞬時(shí)和微弱的蛋白互作
Fig. 1 加入雌二醇培養(yǎng)48 hr的大鼠胚胎海馬神經(jīng)元，原位顯示ER α與DYX1C1在神經(jīng)突觸中的互作。
紅色：ER alpha/DYX1C1復(fù)合物；綠色：actin蛋白；藍(lán)色：細(xì)胞核
2、檢測(cè)蛋白的翻譯后修飾
Fig. 2? EGF刺激前后，用免疫熒光染色和PLA方法檢測(cè)U343細(xì)胞中EGFR磷酸化水平的變化。PLA方法可以檢測(cè)到EGFR的激活，而IF方法則不能。
紅色：磷酸化的EGFR蛋白；藍(lán)色：細(xì)胞核
3、高靈敏性的檢測(cè)低豐度蛋白的表達(dá)
Fig. 3 分別用免疫熒光（左下圖）和PLA方法（上圖）檢測(cè)A431細(xì)胞中EGFR的表達(dá)。與IF方法相比，PLA方法的信噪比高出100倍。
紅色：EGFR蛋白；藍(lán)色：細(xì)胞核
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