(Agarose IDA-Ni Matrix)
產(chǎn)品說明：
本試劑是絡(luò)合金屬鎳離子的4％濃度的交聯(lián)珠狀瓊脂糖基質(zhì)，可用于結(jié)合和分離富含組氨酸等殘基的蛋白質(zhì)分子。
產(chǎn)品內(nèi)容與儲存方法：
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名稱 |
數(shù)量 |
保存條件 |
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Agarose IDA-Ni |
10 ml/50 ml |
4℃ |
試劑瓶含有10 ml/50 ml親和基質(zhì)懸液(50 %)，保存于PBS中，含有20％乙醇作防腐劑。常溫運(yùn)輸，4℃保存（切勿凍結(jié)）。
操作注意事項(xiàng)：
可以采用柱層析法或批次法操作。
1)??? 結(jié)合緩沖液一般采用磷酸或醋酸緩沖液，pH為中性。應(yīng)避免加入高濃度金屬絡(luò)合劑如EDTA，枸掾酸，還原劑如DTT，Tris，HEPES等，離子型去污劑如SDS，Sarkosyl等。詳見附表。可加入一定量的NaCl（0.15~0.5 M）以減少離子間相互作用。高濃度的鹽酸胍（6 M）和尿素（8 M）存在時(shí)蛋白仍可有效親和吸附。
2)??? 基質(zhì)的蛋白結(jié)合容量因蛋白不同而有差異，一般每ml基質(zhì)可結(jié)合數(shù)百微克至數(shù)毫克蛋白。
3)??? 可采用一定濃度的咪唑洗脫吸附的蛋白。通常250 mM以下濃度即可將親和吸附的蛋白洗脫。
基質(zhì)再生：
推薦僅用于相同蛋白分子純化時(shí)重復(fù)使用。
1)??? 新鮮基質(zhì)使用后，5倍柱床體積(CV)蒸餾水清洗，繼以3 CV 20％乙醇清洗。4℃保存。
2)??? 新鮮基質(zhì)使用3~5次后，按以下順序清洗：5 CV蒸餾水，5 CV 100mM EDTA(pH 8.0)，5 CV蒸餾水，2 CV 100mM ?NiSO4，5? CV蒸餾水，3 CV 20％乙醇。4℃保存。
3)??? 嚴(yán)重污染基質(zhì)，需先用2CV鹽酸胍(6? M)清洗，5 CV蒸餾水洗后，繼以3 CV 2% SDS清洗，再用升高梯度乙醇清洗殘留SDS，降低梯度乙醇過渡至蒸餾水。然后按2步驟清洗保存。
附表：
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可能對蛋白結(jié)合有影響的緩沖液成分 |
使用濃度應(yīng)低于 |
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Tris, HEPES, MOPS |
100 mM |
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EDTA, EGTA |
1 mM |
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2-mercaptoethanol |
20 mM |
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DTT, DTE |
1 mM |
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Triton, Tween, NP-40 |
2% |
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SDS, Sarkosyl |
0.3% |